Příprava imunosorbentu pro izolaci klinicky významných biomarkerů

Abstract

Práce je zaměřena na přípravu imunosorbentů tvořených magnetickými mikročásticemi s kovalentně vázanými monovalentními H+L fragmenty imunoglobulinu G (IgG). K přípravě funkčních H + L fragmentů bylo nutné izolovat imunoglobulin G z hyperimunního séra pomocí nosiče s imobilizovaným proteinem A nebo byl použit komerčně dodávaný IgG v lyofilizované formě. Fragmentace IgG byla prováděna pomocí redukčního činidla 2-merkaptoethylaminu (2-MEA) v přítomnosti chelatačního činidla kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA). 75 kDa fragmenty IgG vzniklé redukcí disulfidických vazeb v pantové oblasti IgG byly imobilizovány přes volné ?SH skupiny na částice s thiolovými nebo bromoacetylovými funkčními skupinami. Podmínky fragmentace a následné imobilizace byly optimalizovány. Srovnávána byla také účinnost fragmentace lidského lyofilizovaného IgG a nativního izolovaného IgG.