Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcí

Sladká, Michaela

Digitální knihovna UPCE
→
Fakulta chemicko-technologická / Faculty of Chemical Technology
→
Katedra biologických a biochemických věd / Department of Biological and Biochemical Sciences
→
Diplomové práce / Theses KBBV FCHT (Mgr.)
→
Zobrazit záznam

dc.contributor.advisor	Kanďár, Roman
dc.contributor.author	Sladká, Michaela
dc.date.accessioned	2008-08-12T06:17:56Z
dc.date.available	2008-08-12T06:17:56Z
dc.date.issued	2008
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10195/28742
dc.description.abstract	Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem (valinu, leucinu a isoleucinu), methioninu, fenylalaninu a tyrosinu je v současné době nejspolehlivějším přístupem pro diagnostiku nemoci javorového sirupu, hypermethioninemie, fenylketonurie a tyrosinemie. Byla vyvinuta HPLC metoda pro stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem, methioninu, fenylalaninu a tyrosinu v plazmě a plné krvi. Před separací jsme provedli derivatizaci těchto aminokyselin pomocí o ftaldialdehydu. Pro separaci jsme použili chromatografickou kolonu LiChroCart 125 4 Purospher RP 18e, 5 ?m. Efluent byl monitorován pomocí fluorescenčního detektoru. Jako mobilní fázi A jsme použili 25 mmol/l Na2HPO4 - methanol (90:10, v/v), pH 6,5?0,1, jako B 100% methanol. Analytické parametry metody byly vyhovující pro všechny stanovované aminokyseliny. Kalibrační křivka byla lineární v celém rozsahu testovaných koncentrací. Orientační hodnoty u skupiny dobrovolných dárců krve byly 231,69 36,12 ?mol/l pro valin, 191,55 35,03 ?mol/l pro leucin, 55,34 10,79 ?mol/l pro isoleucin, 37,26 35,71 ?mol/l pro methionin, 73,17 10,01 ?mol/l pro fenylalanin a 51,08 11,87 ?mol/l pro tyrosin. Orientační hodnoty u novorozenců byly 166,34 40,01 ?mol/l pro valin, 139,84 31,36 ?mol/l pro leucin, 51,08 13,02 ?mol/l pro isoleucin, 22,06 4,70 ?mol/l pro methionin, 71,79 15,39 ?mol/l pro fenylalanin a 127,75 31,78 ?mol/l pro tyrosin. Vyvinuli jsme jednoduchou, relativně rychlou a selektivní HPLC metodu s fluorimetrickou detekcí pro stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem, methioninu, fenylalaninu a tyrosinu v plazmě a suché krevní skvrně. Prezentovaná metoda je citlivá, přesná a správná pro vyšetřované vzorky a je vhodná jak pro výzkumné účely, tak také pro klinickou praxi.	cze
dc.format	91 s.	cze
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.subject	valine	eng
dc.subject	leucine	eng
dc.subject	isoleucine	eng
dc.subject	methionine	eng
dc.subject	phenylalanine	eng
dc.subject	tyrosine	eng
dc.subject	maple syrup urine disease	eng
dc.subject	hypermethioninemia	eng
dc.subject	phenylketonuria	eng
dc.subject	tyrosinemia	eng
dc.subject	fluorescence detection	eng
dc.subject	valin	cze
dc.subject	leucin	cze
dc.subject	isoleucin	cze
dc.subject	methionin	cze
dc.subject	fenylalanin	cze
dc.subject	tyrosin	cze
dc.subject	nemoc javorového sirupu	cze
dc.subject	hypermethioninemie	cze
dc.subject	fenylketonurie	cze
dc.subject	tyrosinemie	cze
dc.subject	HPLC	cze
dc.subject	fluorimetrická detekce	cze
dc.title	Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcí	cze
dc.title.alternative	Determination of branched-chain amino acids using HPLC with fluorescence detection	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dc.date.accepted	2008
dc.description.abstract-translated	The determination of branched-chain amino acids (valine, leucine and isoleucine), methionine, phenylalanine and tyrosine is presently the most reliable direct approach to the diagnosis of maple syrup urine disease, hypermethioninemia, phenylketonuria and tyrosinemia. A HPLC method for measurement of branched-chain amino acids, methionine, phenylalanine and tyrosine in plasma and whole blood has been developed and evaluated. Before the separation, the amino acids were derivatized with o phthaldialdehyde. For the separation, reverse phase column LiChroCart 125 4 Purospher RP 18e, 5 ?m, was used. Efluent was monitored with fluorescence detector. The mixture 25 mmol/l Na2HPO4 - methanol (90:10, v/v), pH 6.5?0.1 was used as mobile phase A and 100% methanol was used as mobile phase B. The analytical performance of this method is satisfactory for determination of all amino acids. The calibration curve was linear in the whole range tested. The preliminary reference ranges in a group of blood donors are: 231.69 36.12 ?mol/l of valine, 191.55 35.03 ?mol/l of leucine, 55.34 10.79 ?mol/l of isoleucine, 37.26 35.71 ?mol/l of methionine, 73.17 10.01 ?mol/l of phenylalanine and 51.08 11.87 ?mol/l of tyrosine for plasma. The preliminary reference ranges in newborns are: 166.34 40.01 ?mol/l of valine, 139.84 31.36 ?mol/l of leucine, 51.08 13.02 ?mol/l of isoleucine, 22.06 4.70 ?mol/l of methionine, 71.79 15.39 ?mol/l of phenylalanine and 127.75 31.78 ?mol/l of tyrosine. We have developed a simple, relatively rapid and selective HPLC method with fluorescence detection for the determination of branched chain amino acids, methionine, phenylalanine and tyrosine in plasma and dried blood spots. This method provides excellent sensitivity, precision, and accuracy in follow-up samples and is suitaible for research whereas can be easily for clinical testing purposes.	eng
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.identifier.signature	D18034
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze