Optimalizace podmínek vazby kináz GSK-3 a MAPK na superparamagnetické částice

Panýrová, Martina

Publikace:
Optimalizace podmínek vazby kináz GSK-3 a MAPK na superparamagnetické částice

Diplomová práceOmezený přístup

dc.contributor.advisor	Slováková, Marcela	cze
dc.contributor.author	Panýrová, Martina
dc.date.accepted	2010	cze
dc.date.accessioned	2010-07-03T13:14:25Z
dc.date.available	2010-07-03T13:14:25Z
dc.date.issued	2010
dc.description.abstract	V diplomové práce byly provedeny optimalizace podmínek fosforylace substrátu CREB fosfopeptidu (cAMP Response Element Binding Protein) enzymem GSK-3 a substrátu TH 24 - 33 (Tyrosine hydroxylase 24 - 33) enzymem MAPK- His tag a optimalizace podmínek imobilizace obou enzymů na superparamagnetické částice. Mezi sledované parametry patřily teplota a délka fosforylace. GSK-3 byla imobilizována na magnetické nosiče SiMAG-IDA/Nickel, SiMAG-PGL, SiMAG-IDA/Co3+ a BcMAG Aldehyde magnetické částice. MAPK- His tag byla úspěšně imobilizována na SiMAG-IDA/Co3+ a BcMAG Aldehyde magnetické částice. U všech nosičů pro GSK-3 byla sledována skladovací stabilita, u některých případně operační stabilita. Nejstabilnější byla imobilizace GSK-3 na SiMAG-IDA/Co3+ sledovaná po jednom týdnu. GSK-3 i MAPK-His tag byly pouţity pro přípravu tzv. hyperfosforylovaného tau proteinu, jako standardu. Tau protein byl štěpen imobilizovaným trypsinem. Fosforylace peptidových substrátů byly potvrzeny pomocí MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie. Následnou analýzou MALDI TOF/TOF se potvrdila fosforylace u tau peptidu 45 - 67 s Mr 2471 Da.	cze
dc.description.abstract-translated	In this diploma thesis there were optimized conditions of phosphorylation for substrates CREB phosphopeptide by enzyme GSK-3 and for TH 24 - 33 by enzyme MAPK-His tag, and further optimization of conditions for GSK-3 and MAPK immobilization on different superparamagnetic particles. Two parameters were tested, temperature and time of phosphorylation. For immobilization of GSK-3 these superparamagnetic particles were applied: SiMAG-IDA/Nickel, SiMAG-PGL, SiMAG-IDA/Co3+ and BcMAG Aldehyde. MAPK-His tag was successfully immobilized on SiMAG-IDA/Co3+ and BcMAG Aldehyde superparamagnetic particles. Storage and operational stability of each immobilized GSK-3 reactors were monitored. The most stable immobilized GSK-3 reactor was prepared on SiMAG-IDA/Co3+. GSK-3 and MAPK-His tag were applied for preparing so-called hyperphosphorylated tau protein, which occurs in patients with Alzheimer´s disease. Phosphorylation of peptide substrates and tau proteins were detected by MALDI-TOF and MALDI-TOF/TOF mass spectrometry.	eng
dc.description.defence	1) Prezentace výsledků DP 2) Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3) Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP	cze
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	104 s., 41 příloha	cze
dc.format.extent	5410833 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.signature	D21802	cze
dc.identifier.signature	D21802
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/36522
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Práce není přístupná	cze
dc.subject	Alzheimerova nemoc	cze
dc.subject	tau protein	cze
dc.subject	GSK-3	cze
dc.subject	MAPK	cze
dc.subject	fosforylace	cze
dc.subject	imobilizace kináz	cze
dc.subject	Alzheimer´s disease	eng
dc.subject	tau protein	eng
dc.subject	GSK-3	eng
dc.subject	MAPK	eng
dc.subject	phosphorylation	eng
dc.subject	kinase immobilization	eng
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.title	Optimalizace podmínek vazby kináz GSK-3 a MAPK na superparamagnetické částice	cze
dc.title.alternative	Optimization of GSK-3 and MAP kinases immobilization to superparamagnetic particles	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication