Charakterizácia oligosacharidov a krátkych polysacharidov vzniknutých štiepením kyseliny hyalurónovej metódami kvapalinovej chromatografie a štúdium kinetiky štiepenia kyseliny hyalurónovej

Abstract

Hlavným cieľom tejto práce bolo nájsť priemyselne využiteľný spôsob štiepenia hyaluronátu sodného s molekulovou hmotnosťou 1,3 - 1,8 MDa na hyaluronát sodný s nízkou molekulovou hmotnosťou (0,3 MDa a menej) až oligosacharidy. Boli získané rozsiahle dáta popisujúce alternatívne spôsoby štiepenia HA o rôznej molekulovej hmotnosti. Na experimenty realizované v laboratórnych podmienkach bola vybratá metóda kyslej hydrolýzy, pričom boli obmieňané podmienky štiepenia reťazca hyaluronanu. Ako najzaujímavejšie sa javili metódy štiepenia využitím mikrovĺn a pomocou klasického ohrevu na varnom hniezde. Pre štiepenie hyaluronátu sodného kyslou hydrolýzou využitím mikrovlnného žiarenia pri pH 3 a teplote 105 °C bola stanovená rýchlostná konštanta 5 × 10-6 s-1. Štruktúra štiepeného hyaluronanu bola analyzovaná použitím FT-IR, HPLC a NMR alebo UV-VIS spektroskopiou. Boli pripravené technologické podklady pre priemyselnú výrobu nízkomolekulárnej kyseliny hyalurónovej. Bol navrhnutý postup výroby a overoval sa v poloprevádzke. Na základe nedostatkov, ktoré počas výroby vznikli, bol upravovaný a optimalizovaný. Na základe získaných výsledkov bol spracovaný návrh výrobného reglementu, ktorý poslúžil ako podklad pre zavedenie výroby nízkomolekulárnej a oligomérnej HA.