Optimalizace podmínek izolace miRNA z biologického materiálu pomocí TiO2 mikrosfér

Abstract

Nekódující RNA, mezi něž patří i miRNA, jsou předmětem výzkumu s cílem jejich použití jako biomarkerů pro odlišení fyziologického od patologického stavu lidského organismu. To vedlo k potřebě jejich účinné izolace z komplexních biologických vzorků za účelem jejich následné detekce. Tato diplomová práce se zabývá izolací miRNA pomocí TiO2 mikrosfér z biologických vzorků představujících buňky a sérum. Hlavní úkol spočíval v zavedení možnosti izolace miRNA z lidského séra pomocí TiO2 mikrosfér. K tomu bylo nutné provést několik optimalizačních kroků v již známém protokolu s cílem minimalizovat působení RNas při zachování účinnosti izolace, které je běžně dosahováno např. u buněčného lyzátu. Samotné vyšetření séra je oproti cytologickému vyšetření např. biopsii mnohem méně invazivní, což umožňuje nejen diagnostiku v počátku onemocnění, ale také možnost průběžného sledování stavu pacienta. Dále byla zkoumána kompatibilita optimalizovaného izolačního postupu s detekcí pomocí polymerázové řetězové reakce, která se pro detekci miRNA využívá z důvodu vysoké citlivosti. Metoda s vysokou citlivostí je zapotřebí kvůli přirozeně nízké koncentraci miRNA v biologických vzorcích. Tato metoda izolace miRNA pomocí TiO2 mikrosfér a následné detekce pomocí polymerázové řetězové reakce by mohla potencionálně sloužit pro sledování změn v expresi miRNA v sérech pacientů. Na základě změn exprese miRNA by docházelo k včasnému odhalení rakovinného onemocnění bez nutnosti odběru tkáně.