Optimalizace kultivačních podmínek hepatocytů v primární kultuře

Abstract

Tato diplomová práce byla zaměřena na optimalizaci kultivačních podmínek hepatocytů v primární kultuře s ohledem na densitu buněk a dobu potřebnou pro přichycení buněk k povrchu mikrotitračních destiček (tzv. dobu seedingu). Primární kultury hepatocytů jsou používány pro toxikologické a farmakokinetické studie, pro studium metabolismu a genové exprese. Životaschopnost kultivovaných buněk a míra jejich poškození byla hodnocena pomocí aktivity buněčných dehydrogenáz (WST-1 test), aktivity laktátdehydrogenázy (LDH), resp. LDH-leakage, a aktivity kaspázy 3. Nejprve byla optimalizována densita buněk pro vybrané typy mikrotitračních destiček. Z výsledků vyplývá, že optimální density jsou 30 000 bb/j pro 96jamkové destičky, 200 000 bb/j pro 24jamkové destičky a 350 000 bb/j pro 12jamkové destičky. Tyto hodnoty odpovídají přibližně densitě 1,0×105 bb/cm2. Druhým úkolem bylo optimalizovat dobu potřebnou pro přichycení buněk k povrchu kultivačních destiček. Bylo zjištěno, že testované doby nemají vliv na hodnocené parametry hepatocytů.