Stanovení vybraných aminokyselin v plazmě pacientů s diabetes mellitus

Abstract

Tématem diplomové práce je stanovení vybraných aminokyselin v plazmě pacientů s diabetes mellitus. Byla popsána HPLC metoda s fluorescenční detekcí pro stanovení vybraných aminokyselin v lidské plazmě. Po odpovídající přípravě vzorku byly aminokyseliny derivatizovány s naftalen-2,3-dikarboxaldehydem za vzniku stabilního, vysoce fluoreskujícího derivátu. Pro separaci derivátů byla použita chromatografická kolona LiChroCart 250 x 4,0 mm Purospher Star RP-18e, 5 mikrom. Pro analýzu aminokyselin byla použita jako mobilní fáze A směs 25mmol/l NaH2PO4 a ethanolu (80:20, v/v), pH 7,2 ± 0,1, jako mobilní fáze B byl použit 100% ethanol. Analytické parametry metody u vybraných aminokyselin byly vyhovující. Linearita byla dosažena v celém rozsahu testovaných koncentrací. Přesnost v sérii vyjádřená variačním koeficientem byla pod 10 %. U pacientů s diabetes mellitus 2.typu byly v porovnání s kontrolní skupinou nalezeny statisticky významně vyšší hladiny aminokyselin s rozvětveným řetězcem. Vyvinuli jsme citlivou a dostatečně selektivní HPLC metodu s fluorescenční detekcí pro stanovení aminokyselin v lidské plazmě.