Fluorescenční metody pro detekci buněčného poškození

Čapek, Jan

Publikace:
Fluorescenční metody pro detekci buněčného poškození

Disertační práceopen access

dc.contributor.author	Čapek, Jan
dc.contributor.referee	Hroch, Miloš
dc.contributor.referee	Vrbacký, Marek
dc.date.accepted	2020-06-19
dc.date.accessioned	2020-07-22T07:37:50Z
dc.date.available	2020-07-22T07:37:50Z
dc.date.issued	2020
dc.date.submitted	2020-02-24
dc.description.abstract	Fluorescenční metody jsou specifické, citlivé a selektivní. Často jsou pro tyto vlastnosti využívány v přírodních vědách pro detekci různých buněčných parametrů. Pomocí fluorescenčních sond jsme schopni detekovat intracelulární koncentrace analytů, potenciály na membránách buněk i organel či vizualizovat buněčné organely. Cílem naší práce bylo optimalizovat spektrofluorimetrickou metodu pro rutinní detekci koncentrace glutathionu (GSH) v buňkách. Dále pak optimalizovat spektrofluorimetrickou metodu pro detekci fragmentované DNA a využít tyto, i další fluorescenční metody pro charakterizaci toxického působení CdCl2. Při detekci intracelulárních koncentrací GSH jsme využili fluorescenční sondu monochlorobiman. Při vyhodnocení získaného fluorescenčního signálu v čase jsme optimalizovali analýzu detekovaného signálu. Koncentrace glutathionu vypočtené pomocí nově vypracované metodiky jsme následně porovnali jak se standardně používaným zpracováním naměřených dat, tak i s koncentracemi GSH naměřenou pomocí referenční metody využívající o-ftalaldehyd. Kromě shodných výsledků naměřených optimalizovanou i referenční metodou jsme prokázali také velmi silnou korelaci obou metod při analýze biologických vzorků (r = 0,96). Pro spektrofluorimetrickou detekci fragmentovane DNA jsme využili sondu Hoechst 33258, pomocí které jsme detekovali signifikantní vliv vybraných modelových toxinů na proces fragmentace DNA. Nejvyšší narůst fluorescence Hoechst 33258 jsme detekovali u buněk ovlivněnych 50 a 100 ěM cisplatinou po 24 hod inkubaci. Nasledně jsme v posledni části práce detekovali změny koncentrace GSH, fragmentaci DNA, mitochondriální membránový potenciál a produkci ROS u buněk inkubovaných s CdCl2.	cze
dc.description.abstract-translated	Fluorescent methods are specific, sensitive and selective. These properties are frequently used in scientific studies to detect various cellular parameters. Using fluorescence probes, we are allowed to detect intracellular concentrations of analytes, membrane potentials in cells and organelles or to visualize cell organelles. The aim of our work was to optimize spectrofluorimetric method for routine measurement of glutathione (GSH) concentration in cells. Other partial aims of the study were to optimize the spectrofluorimetric method for the detection of fragmented DNA and to use these and other fluorometric methods to characterize the toxic effect of CdCl2. We used the fluorescent probe monochlorobiman to detect intracellular GSH concentrations. Firstly, we optimized the evaluation of fluorescence intensity signal over time. Consequently, we compared the glutathione concentrations obtained using the optimized calculation method with both the standardly used method and with the GSH levels measured using the reference o-phthalaldehyde method. We found the similarity of the results obtained using optimized and reference methods when we obtained a very strong correlation of both methods in the analysis of biological samples (r = 0.96). For spectrofluorometric detection of fragmented DNA, we used the Hoechst 33258 probe to detect a significant effect of selected model toxic compounds on DNA fragmentation. The highest increase of Hoechst 33258 fluorescence was detected in cells treated with 50 and 100 ěM cisplatin after 24 h. Subsequently, we detected changes in GSH concentration, DNA fragmentation, mitochondrial membrane potential and ROS production in cells incubated with CdCl2.	eng
dc.description.department	Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.identifier	Univerzitní knihovna (studovna)	cze
dc.identifier.signature	D40326
dc.identifier.stag	40106
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/75958
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Bez omezení
dc.subject	glutathion	cze
dc.subject	monochlorobiman	cze
dc.subject	fragmentace DNA	cze
dc.subject	reaktivní formy kyslíku	cze
dc.subject	kadmium	cze
dc.subject	glutathione	eng
dc.subject	monochlorobimane	eng
dc.subject	DNA fragmentation	eng
dc.subject	reactive oxygen species	eng
dc.subject	cadmium	eng
dc.thesis.degree-discipline	Analytická chemie	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Ph.D.
dc.thesis.degree-program	Analytická chemie	cze
dc.title	Fluorescenční metody pro detekci buněčného poškození	cze
dc.title.alternative	Fluorometric methods detecting cell damage	eng
dc.type	disertační práce	cze
dspace.entity.type	Publication