Imobilizace Clostripainu na magnetické nosiče a jeho využití pro fragmentaci Tau proteinu

Matošková, Lucie

Publikace:
Imobilizace Clostripainu na magnetické nosiče a jeho využití pro fragmentaci Tau proteinu

Diplomová práceOmezený přístup

dc.contributor.advisor	Korecká, Lucie	cze
dc.contributor.author	Matošková, Lucie
dc.date.accepted	2010	cze
dc.date.accessioned	2010-07-03T11:52:03Z
dc.date.available	2010-07-03T11:52:03Z
dc.date.issued	2010
dc.description.abstract	Diplomová práce byla zaměřena na zavedení metody stanovení aktivity proteolytického enzymu Clostripainu, optimalizaci reakčních podmínek, imobilizaci na vhodný magnetický nosič a jeho následné použití pro fragmentaci tau proteinu. Aktivita Clostripainu byla měřena pomocí chromogenního substrátu BApNA (N-alfa-benzoyl-D, L-arginin-p-nitroanilid). Byly optimalizovány reakční podmínky Clostripainu, a to doba aktivace enzymu, optimální reakční teplota a čas, poměr E:S. Pro imobilizaci byly vyzkoušeny různé metody kovalentní vazby. Z magnetických nosičů pro imobilizaci Clostripainu byly vybrány magnetické částice Chemicell s karboxylovými, aminovými, polyglutaraldehydovými, hydrazinovými a kyanurátovými funkčními skupinami a magnetická makroporézní perlová celulóza s -OH funkčními skupinami. Na základě výsledků byl vybrán nejvhodnější nosič a byla u něj stanovena skladovací a operační stabilita imobilizovaného Clostripainu. Specifita štěpení imobilizovaným Clostripainem byla nejprve ověřena pomocí modelového proteinu melittinu, a poté byl nosič aplikován pro fragmentaci tau proteinu. Vzorky byly analyzovány pomocí SDS-PAGE elektroforézy a MALDI-TOF-MS.	cze
dc.description.abstract-translated	Presented thesis was focused on implementation of suitable method for determination of Clostripain activity, optimization of reaction conditions, immobilization onto appropriate magnetic carriers and its subsequent use for fragmentaion of tau protein. The low molecular mass substrate BApNA (N-alfa-benzoyl-D, L-arginin-p-nitroanilid) was used for confirmation of the activity of Clostripain. Reaction conditions of Clostripain, such as time of activation, the optimal temperature of reaction and the ratio of E:S were optimized. Various methods of covalent bonding were tested. Magnetic particles with carboxyl, amino, polyglutaraldehyde, hydrazide and cyanuric groups and magnetic macroporous bead celulose with carboxyl groups were chosen as carriers for Clostripain immobilization. Various methods of immobilization by covalent bond were tested. Based on the results, the most convenient carrier was selected, where the storage and operational stability were determined. Specifity of enzymatic digestion of immobilized Clostripain was verified using Melisin as model protein and then was carrier applied to the fragmentation of tau protein. Samples were analyzed by SDS-PAGE and by MALDI-TOF-MS.	eng
dc.description.defence	1. Prezentace výsledků diplomové práce 2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a přípomínky k DP	cze
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	99 s.	cze
dc.format.extent	2100552 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.signature	D21784	cze
dc.identifier.signature	D21784
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/36361
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Práce není přístupná	cze
dc.subject	Clostripain	cze
dc.subject	endoproteináza Arg-C	cze
dc.subject	magnetické částice	cze
dc.subject	tau protein	cze
dc.subject	Alzheimerova choroba	cze
dc.subject	Clostripain	eng
dc.subject	endoproteinase Arg-C	eng
dc.subject	Magnetic particles	eng
dc.subject	tau protein	eng
dc.subject	Alzheimer's disease	eng
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.title	Imobilizace Clostripainu na magnetické nosiče a jeho využití pro fragmentaci Tau proteinu	cze
dc.title.alternative	Immobilization of Clostripain onto magnetic carriers and its utilization for Tau protein fragmentation	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication