Vliv růstových faktorů na expresi genů v jaterních myofibroblastech potkanů

Abstract

Jaterní tkáň je tvořena několika typy buněk. Při poranění jater dochází k fibrotizaci nekrotické tkáně, pomocí aktivovaných jaterních hvězdicovitých buněk (HSC) a portálních myofibroblastů. V této práci jsme sledovaly vliv kultivačního prostředí v kombinaci s růstovým faktorem FGF-1 na expresi určitých genů v jaterních myofibroblastech. V první fázi experimentu jsme se zaměřily na srovnání exprese genů v buňkách kultivovaných v dvojrozměrném (2D) prostředí na polystyrenových Petriho miskách s kultivací v trojrozměrném (3D) kolagenním gelu. V obou případech po dvanácti hodinové expozici růstovým faktorem FGF-1. V druhé fázi pokusu jsme se zaměřili na interakci FGF-1 s heparinem. Buňky jsme získali z frakce neparenchymových jaterních buněk potkanů pomocí opakovaného pasážování. Buňky jsme kultivovaly v kolagenním gelu a na plastu v kultivačním médiu s přídavkem růstového faktoru. Po kultivaci jsme z buněk izolovali celkovou RNA, která byla převedena pomocí reverzní transkriptázy na cDNA. Expresi genů jsme stanovili pomocí rtRT-PCR. Data jsme statisticky zpracovali pomocí Studentova t-testu. Z experimentu vyplynulo, že kultivační prostředí má zásadní vliv na kultivované myofibroblasty a že FGF-1 ovlivňuje expresi genů v jaterních myofibroblastech. Naše práce přinesla i poznatek, že exprese genů buněk kultivovaných s FGF-1 a buněk kultivovaných s FGF-1 a heparinem, se liší. Zaměřili jsme se na změny v expresi genů matrix metaloproteinázy 9, matrix metaloproteinázy 13 a osteopontinu