Využití imobilizovaného lysozymu pro fragmentaci bakteriálních buněk pro MS analýzu

Abstract

V rámci diplomové práce byla optimalizována metoda stanovení aktivity lysozymu v mikrotitrační destičce pomocí substrátu Micrococcus luteus, přípraven magnetický nosič s imobilizovaným lysozymem, stanovena operační a skladovací stabilita tohoto imobilizovaného lysozymu a připravený nosič byl využit pro fragmentaci bakteriálních buněk pro jejich snazší identifikaci pomocí hmotnostní spektrometrie. K přípravě magnetického nosiče byly vybrány částice s hydroxylovými a karboxylovými funkčními skupinami. Pro fragmentaci buněk byly využity částice s hydroxylovými funkčními skupinami. U těchto částic byla také stanovena operační a skladovací stabilita imobilizovaného lysozymu s pomocí fluorescenčního substrátu 4-methylumbelliferyl-β-D-N,N',N''-triacetylchitotriosidu. Vedle lysozymu byl k fragmentaci buněčné stěny využíván také roztok acetonitrilu s kyselinou trifluoroctovou. Výsledky fragmentace byly ověřovány elektroforeticky a pomocí MALDI – TOF MS.