Charakterizace nukleární kondenzace a fragmentace u modelového poškození buněk

Abstract

Diplomová práce se zabývá detekcí nukleárních změn, které se objevují v průběhu apoptotického procesu. Teoretická část se věnuje popisu mechanismu apoptotické buněčné smrti s důrazem na jaderné změny, dále jsou zde popsány fluorescenční metody a fluorescenční sondy používané k detekci těchto jaderných změn. V závěru se teoretická část zabývá suspenzními buněčnými liniemi. Experimentální část je zaměřena na detekci nukleární kondenzace a fragmentace pomocí kvantitativní spektrofluorimetrické metody Hoechst 33258 a především na její optimalizaci pro suspenzní buňky. Pro optimalizaci jsme zvolili buněčnou linii Jurkat, kterou jsme inkubovali s induktory apoptózy - cisplatinou, kamptotecinem a staurosporinem. Ke zhodnocení cytotoxicity vybraných toxinů jsme nejprve použili testy pro stanovení aktivity mitochondriálních dehydrogenáz a intracelulární hladiny glutathionu. Následně jsme detekovali nukleární kondenzaci a fragmentaci metodou Hoechst 33258 a provedli optimalizaci parametrů měření pro suspenzní buňky. Výsledky jsou shrnuty a diskutovány v závěru práce.