Imobilizace lysozymu na magnetické mikročástice pro účely obohacení bakteriálních extraktů určených k identifikaci mikroorganismů

Abstract

Diplomová práce byla zaměřena na vytipování a zavedení vhodné metody pro stanovení aktivity solubilního lysozymu, přípravu magnetického nosiče s imobilizovaným lysozymem a moţnost praktického vyuţití jak solubilní tak imobilizované formy lysozymu pro fragmentaci buněčné stěny grampozitivních bakterií. Aktivita solubilního a následně imobilizovaného lysozymu, stejně jako optimalizace reakčních podmínek byla provedena s vyuţitím různých druhů syntetických substrátů, ze kterých se pro naše účely nejlépe osvědčil fluorescenční substrát 4-methylumbelliferyl-ß-D-N,N´,N´´-triacetylchitotriosid. Pro přípravu bioaktivního nosiče vyuţitelného k fragmentaci buněčné stěny grampozitivních bakterií byly vybrány magnetické částice s karboxylovými a hydroxylovými funkčními skupinami s rozdílnou velikostí částic a porozitou. Na základě výsledků byl vybrán nejvhodnější nosič, u kterého byla stanovena skladovací a operační stabilita imobilizovaného lysozymu. Obě formy enzymu byly následně pouţity k fragmentaci buněčné stěny bakterií s následnou identifikací pomocí MALDI - TOF MS.