Porovnání metod pro stanovení glutathionu v biologickém materiálu

Davidová, Kateřina

Publikace:
Porovnání metod pro stanovení glutathionu v biologickém materiálu

Diplomová práceopen access

dc.contributor.advisor	Roušar, Tomáš
dc.contributor.author	Davidová, Kateřina
dc.contributor.referee	Štěpánková, Šárka	cze
dc.date.accepted	2018-06-04
dc.date.accessioned	2018-06-14T06:03:56Z
dc.date.available	2018-06-14T06:03:56Z
dc.date.issued	2018
dc.date.submitted	2018-05-07
dc.description.abstract	Glutathion je tripeptid, složený z glycinu, cysteinu a kyseliny glutamové. Jedná se o nízkomolekulární antioxidant, který má mnoho důležitých funkcí. V buňkách je přítomen v oxidované (GSSG) nebo redukované formě (GSH). V současné době existuje mnoho metod ke stanovení GSH i GSSG. Cílem naší práce bylo využít a porovnat dvě metody využívající o-ftaldialdehyd (OPA) a monochlorobiman (MCB) při stanovení GSH v různých druzích biologického materiálu. Při stanovení GSH v myších jaterních homogenátech byla zjištěna velmi silná korelace mezi použitými metodami (r = 0,94). Absolutně vyjádřené koncentrace GSH neředěných homogenátů byly vyšší u OPA metody. Absolutně vyjádřené koncentrace GSH u homogenátů ředěných 10x deionizovanou vodou byly podobné u obou metod, v některých případech byly vyšší u MCB metody. Před stanovením GSH v buňkách periferní krve byly optimalizovány podmínky stanovení. U obou metod bylo optimalizováno ředění krve. U MCB metody byla navíc optimalizována aktivita glutathion-S-transferázy (GST) a excitační vlnová délka. Metody mezi sebou velmi dobře korelovaly (r = 0,91). Absolutně vyjádřené koncentrace GSH byly vyšší u MCB metody. V poslední části naší práce byly pomocí obou metod stanovovány koncentrace GSH v kultivovaných buňkách A549 a HK-2. Korelační koeficient byl v tomto případě také velmi vysoký (r = 0,97). Absolutně vyjádřené koncentrace GSH byly vyšší u OPA metody. Rozdíly v absolutně vyjádřených koncentrací GSH byly pravděpodobně způsobeny dodatečně přidanou GST, která katalyzovala rychlou a specifickou reakci mezi MCB a GSH. GST byla přidána do vzorků periferní krve, proto mohly být absolutně vyjádřené koncentrace GSH vyšší právě u MCB metody. Naopak v případě jaterních homogenátů a kultivovaných buněk nebyla GST přidána.	cze
dc.description.abstract-translated	Glutathione is a tripeptide consisting of glycine, cysteine and glutamic acid. It is a low molecular weight antioxidant that has many important functions. It is present in oxidized (GSSG) or reduced (GSH) forms in cells. Currently, there are a number of methods determining GSH and GSSG. The aim of our work was to use and to compare two methods using o-phthaldialdehyde (OPA) and monochlorobimane (MCB) determining GSH in various biological material. When GSH was determined in mouse liver homogenates, a very strong correlation was found between used methods (r = 0.94). Absolute concentrations of GSH in undiluted homogenates were higher in the OPA method. Absolutely expressed concentrations of GSH in homogenates diluted 10x with deionized water were similar for both methods, in some cases higher in the MCB method. Before the determination of GSH in peripheral blood, the assay conditions were optimized. Dilution of blood was optimized for both methods. In addition, the activity of glutathione-S-transferase (GST) and excitation wavelength were optimized in MCB method. The methods correlated each other strongly (r = 0.91). Absolute concentrations of GSH were higher in the MCB method. In the last part of our work, the concentrations of GSH were determined in cultured A549 and HK-2 cells. The correlation coefficient was also very high in that case (r = 0.97). Absolutely expressed concentrations of GSH were higher when used the OPA method. The differences between absolutely expressed concentrations of GSH in both methods were likely caused due to the addition of GST, which catalyzed a rapid and specific reaction between MCB and GSH. The GST was added to samples of peripheral blood, therefore absolutely expressed concentrations of GSH were higher in the MCB method. Conversely, in the case of liver homogenates and cultured cells, GST was not added.	eng
dc.description.defence	Prezentace výsledků diplomové práce. Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.	cze
dc.description.department	Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	68 s.
dc.identifier	Univerzitní knihovna ( studovna)	cze
dc.identifier.signature	D37700
dc.identifier.stag	35205
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/70783
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Bez omezení
dc.subject	glutathion	cze
dc.subject	stanovení glutathionu	cze
dc.subject	o-ftaldialdehyd	cze
dc.subject	monochlorobiman	cze
dc.subject	jaterní homogenát	cze
dc.subject	periferní krev	cze
dc.subject	buněčná kultura	cze
dc.subject	glutathione	eng
dc.subject	glutathione assay	eng
dc.subject	o-ftaldialdehyde	eng
dc.subject	monochlorobimane	eng
dc.subject	liver homogenate	eng
dc.subject	peripheral blood	eng
dc.subject	cell culture	eng
dc.thesis.degree-discipline	Bioanalytik	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.title	Porovnání metod pro stanovení glutathionu v biologickém materiálu	cze
dc.title.alternative	Comparison of assays for measurement of glutathione levels in biological material	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication