Porovnání metod pro stanovení glutathionu v biologickém materiálu

Abstract

Glutathion je tripeptid, složený z glycinu, cysteinu a kyseliny glutamové. Jedná se o nízkomolekulární antioxidant, který má mnoho důležitých funkcí. V buňkách je přítomen v oxidované (GSSG) nebo redukované formě (GSH). V současné době existuje mnoho metod ke stanovení GSH i GSSG. Cílem naší práce bylo využít a porovnat dvě metody využívající o-ftaldialdehyd (OPA) a monochlorobiman (MCB) při stanovení GSH v různých druzích biologického materiálu. Při stanovení GSH v myších jaterních homogenátech byla zjištěna velmi silná korelace mezi použitými metodami (r = 0,94). Absolutně vyjádřené koncentrace GSH neředěných homogenátů byly vyšší u OPA metody. Absolutně vyjádřené koncentrace GSH u homogenátů ředěných 10x deionizovanou vodou byly podobné u obou metod, v některých případech byly vyšší u MCB metody. Před stanovením GSH v buňkách periferní krve byly optimalizovány podmínky stanovení. U obou metod bylo optimalizováno ředění krve. U MCB metody byla navíc optimalizována aktivita glutathion-S-transferázy (GST) a excitační vlnová délka. Metody mezi sebou velmi dobře korelovaly (r = 0,91). Absolutně vyjádřené koncentrace GSH byly vyšší u MCB metody. V poslední části naší práce byly pomocí obou metod stanovovány koncentrace GSH v kultivovaných buňkách A549 a HK-2. Korelační koeficient byl v tomto případě také velmi vysoký (r = 0,97). Absolutně vyjádřené koncentrace GSH byly vyšší u OPA metody. Rozdíly v absolutně vyjádřených koncentrací GSH byly pravděpodobně způsobeny dodatečně přidanou GST, která katalyzovala rychlou a specifickou reakci mezi MCB a GSH. GST byla přidána do vzorků periferní krve, proto mohly být absolutně vyjádřené koncentrace GSH vyšší právě u MCB metody. Naopak v případě jaterních homogenátů a kultivovaných buněk nebyla GST přidána.