Poměr glutathiondisulfidu a glutathionu jako možný ukazatel oxidačního stresu u lidí

Abstract

V diplomové práci jsme ověřovali metodu měření celkového glutathionu (tGSH) a glutathiondisulfidu (GSSG) pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí. Vyšetřovali jsme také vhodná antikoagulační, alkylační, redukční a deproteinační činidla s ohledem na stabilitu a výtěţnost. Glutathion reaguje s o-ftaldialdehydem (OPA) za vzniku stabilního, vysoce fluoreskujícího tricyklického derivátu při pH 8, zatímco GSSG reaguje s OPA při pH 12. Při měření GSSG byl GSH blokován N-ethylmaleimidem, s nímţ vytváří GSH komplex. Separace probíhala na koloně Discovery C18 150 x 4 mm, 5 mikro m. Mobilní fází byla směs ethanolu a 25 mmol/l Na2HPO4 (8:92, v/v) o pH 6,0. U skupiny dárců krve jsme stanovili referenční rozmezí celkového glutathionu a glutathiondisulfidu v plné krvi (9,35 +- 1,28) mikromol/g hemoglobinu (Hb) a (0,38 +- 0,06) mikromol/g Hb a plazmě (5,19 +- 1,23) mikromol/l a (0,36 +- 0,13) mikromol/l. Tato HPLC metoda je velmi citlivá a reprodukovatelná pro stanovení celkového glutathionu a glutathiondisulfidu v plné krvi a plazmě.