Poměr glutathiondisulfidu a glutathionu jako možný ukazatel oxidačního stresu u lidí

Vrbová, Martina

Publikace:
Poměr glutathiondisulfidu a glutathionu jako možný ukazatel oxidačního stresu u lidí

Diplomová práceOmezený přístup

dc.contributor.advisor	Kanďár, Roman	cze
dc.contributor.author	Vrbová, Martina
dc.contributor.referee	Kovařík, Jakub	cze
dc.date.accepted	2011	cze
dc.date.accessioned	2011-07-11T18:01:31Z
dc.date.available	2011-07-11T18:01:31Z
dc.date.issued	2011
dc.description.abstract	V diplomové práci jsme ověřovali metodu měření celkového glutathionu (tGSH) a glutathiondisulfidu (GSSG) pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí. Vyšetřovali jsme také vhodná antikoagulační, alkylační, redukční a deproteinační činidla s ohledem na stabilitu a výtěţnost. Glutathion reaguje s o-ftaldialdehydem (OPA) za vzniku stabilního, vysoce fluoreskujícího tricyklického derivátu při pH 8, zatímco GSSG reaguje s OPA při pH 12. Při měření GSSG byl GSH blokován N-ethylmaleimidem, s nímţ vytváří GSH komplex. Separace probíhala na koloně Discovery C18 150 x 4 mm, 5 mikro m. Mobilní fází byla směs ethanolu a 25 mmol/l Na2HPO4 (8:92, v/v) o pH 6,0. U skupiny dárců krve jsme stanovili referenční rozmezí celkového glutathionu a glutathiondisulfidu v plné krvi (9,35 +- 1,28) mikromol/g hemoglobinu (Hb) a (0,38 +- 0,06) mikromol/g Hb a plazmě (5,19 +- 1,23) mikromol/l a (0,36 +- 0,13) mikromol/l. Tato HPLC metoda je velmi citlivá a reprodukovatelná pro stanovení celkového glutathionu a glutathiondisulfidu v plné krvi a plazmě.	cze
dc.description.abstract-translated	A method for the measurement of total glutathione (tGSH) and glutathione disulfide (GSSG) using an HPLC with fluorescence detection and investigation into the suitability of anticoagulant, alkylating, reducing and deproteinizing agents with regard to stability and recovery are described. Glutathione reacts with ortophthalaldehyde (OPA) to form a stable, highly fluorescent tricyclic derivate at pH 8.0, while GSSG reacts with OPA at pH 12.0. At measurement of GSSG, GSH was complexed to N-ethylmaleimide. For the separation, a reserve phase column Discovery C18, 150 mm x 4 mm, 5 mikro m, was used. The mixture of ethanol and 25 mmol/L sodium hydrogenphosphate (8:92, v/v), pH 6.0, was used as a mobil phase. The preliminary reference ranges of total glutathione and glutathione disulfide in a group of blood donors are (9.35 +- 1.28) mikromol/g of hemoglobin (Hb) and (0.38 +- 0.06) mikromol/g Hb for whole blood, (5.19 +- 1.23) mikromol/L and (0.36 +- 0.13) mikromol/L for plasma. This assay is a highly sensitive and reproducible HPLC method for the determination of total glutathione and glutathione disulfide in human whole blood and plasma.	eng
dc.description.defence	1. Prezentace výsledků diplomové práce. 2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce. 3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.	cze
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	59 s.	cze
dc.format.extent	869127 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.signature	D23688
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/39001
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	pouze v rámci univerzity	cze
dc.subject	celkový glutathion	cze
dc.subject	glutathiondisulfid	cze
dc.subject	vysokoúčinná kapalinová chromatografie s fluorescenční detekcí	cze
dc.subject	N-ethylmaleimid	cze
dc.subject	dithiothreitol	cze
dc.subject	o-ftaldialdehyd	cze
dc.subject	total glutathione	eng
dc.subject	glutathione disulfide	eng
dc.subject	high-performance liquid chromatography with fluorescence detection	eng
dc.subject	N-ethylmaleimide	eng
dc.subject	dithiothreitol	eng
dc.subject	orthophthaldehyde	eng
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.title	Poměr glutathiondisulfidu a glutathionu jako možný ukazatel oxidačního stresu u lidí	cze
dc.title.alternative	The ratio of glutathione disulfide to glutathione as a possible marker of oxidative stress in humans	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication