HPLC/ED stanovení kyseliny lipoové v lidské plazmě

Abstract

Kyselina lipoová je přírodně se vyskytující sloučenina, přítomna jako kofaktor v několika mitochondriálních enzymech, které jsou zahrnuty v metabolismu a energetické produkci. Jedná se o 8-uhlíkovou sloučeninu, obsahující dva atomy síry v dithiolanovém kruhu a skládající se ze dvou enantiomerů. Ve své volné formě je kyselina lipoová, především její redukovaná forma, kyselina dihydrolipoová, silným antioxidantem, fungujícím jako "odklizeč" reaktivních forem kyslíku. Dnes je studována zejména pro tyto antioxidační vlastnosti. Pro její analýzu je dostupných mnoho metod. Většina z nich však nejsou vyhovující kvůli jejich nespecifitě, nedostatku citlivosti, dlouhotrvající přípravě vzorku a potřeby drahého analytického vybavení. Z tohoto důvodu jsme se pokusili vyvinout jednoduchou a účinnou metodu pro její stanovení v lidské plazmě použitím HPLC s elektrochemickou detekcí na principu coulometrie. Mobilní fáze byla složená ze směsi 20 mmol/l NaH2PO4/acetonitril/metanol (70:25:5 v/v) a její průtok byl 1 ml/min. Potenciály analytické cely byly nastaveny na 450 mV a 750 mV. Analytické parametry metody jsou dostačující s detekčním limitem11,5 nmol/l. Naše metoda může být použita pro stanovení jak endogenních koncentrací kyseliny lipoové, tak i pro suplementační studie.