Analýza proteinů s využitím imobilizovaného Clostripainu a techniky Selected Reaction Monitoring (SRM)

Abstract

Diplomová práce se zabývá imobilizací proteolytického enzymu Clostripainu na vhodný magnetický nosič a jeho následnou aplikací pro štěpení proteinů v rámci hmotnostně-spektrometrické techniky monitorování vybraných reakcí (SRM). Testovány byly různé magnetické částice lišící se velikostí, porozitou či funkčními skupinami na svém povrchu. Na základě stanovení aktivity byly pro následné štěpení vybrány nosiče, na které bylo navázáno nejvíce enzymu. Pro štěpení byly zvoleny sérový bovinní albumin jako modelový protein a ricin jako konkrétní proteinový toxin. Štěpení bylo pro srovnání prováděno také trypsinem a oba enzymy byly testovány jak v solubilní tak imobilizované formě. Výsledné peptidové fragmenty byly analyzovány pomocí SDS-PAGE a následně byly kvantifikovány pomocí hmotnostního analyzátoru 4000 QTRAP.