HPLC/MS charakterizace regioizomerních směsí triacylglycerolů

Dvořáková, Hana

Publikace:
HPLC/MS charakterizace regioizomerních směsí triacylglycerolů

Disertační práceOmezený přístup

dc.contributor.advisor	Holčapek, Michal	cze
dc.contributor.author	Dvořáková, Hana
dc.contributor.referee	Řezanka, Tomáš	cze
dc.contributor.referee	Valterová, Irena	cze
dc.date.accepted	2013	cze
dc.date.accessioned	2013-03-08T09:38:57Z
dc.date.available	2013-03-08T09:38:57Z
dc.date.issued	2012
dc.description.abstract	Disertační práce se zabývá analýzou komplexních směsí triacylglycerolů, které představují významnou součást naší potravy a mají důležitou roli při mnoha biologických procesech v lidském organizmu. Předkládaný text shrnuje výsledky dosažené při separacích a následných identifikacích triacylglycerolů a jejich regioizomerů obsažených v rostlinných olejích, živočišných tucích a randomizačních směsích. Získané výsledky byly uvedeny ve čtyřech publikacích uveřejněných v mezinárodních odborných časopisech. Jednotlivé triacylglyceroly se mezi sebou mohou lišit v mnoha parametrech. Kombinací triacylglycerolů se v přírodě vytvářejí složité směsi, které není možné bez jejich předchozí důkladné separace identifikovat. Za účelem získání maximálního počtu separovaných triacylglycerolů byly optimalizovány chromatografické podmínky v systému argentační chromatografie. Bylo zjištěno, že složení mobilní fáze a délka chromatografické kolony měly významný vliv na účinnost separace triacylglycerolů a především jejich regioizomerů. V optimalizovaném systému byly analyzovány vzorky rostlinných olejů, živočišných tuků a randomizačních směsí, pro které bylo následně popsáno retenční chování příslušných triacylglycerolů včetně jejich regioizomerů. Dále bylo popsáno retenční chování cis-/trans- izomerů a triacylglycerolů obsahujících neobvyklé mastné kyseliny. Pomocí off-line dvourozměrné chromatografie byly studovány možnosti separace komplexních přírodních směsí triacylglycerolů. Sběr frakcí byl realizován v nevodném systému s obrácenými fázemi a jejich následná separace byla provedena v systému argentační chromatografie. Ortogonalita obou separačních systémů byla testována pro přírodní vzorky triacylglycerolů a jejich regioizomerů, které obsahovaly mastné kyseliny s rozdílnou délkou acylového řetězce, počtem, polohou a geometrií dvojných vazeb a různou regiozomerickou polohou mastných kyselin na skeletu glycerolu. Off-line dvourozměrná chromatografie obou komplementárních módů přinesla lepší chromatografickou selektivitu, která vedla k vyššímu počtu identifikovaných triacylglycerolů. Optimalizace podmínek randomizační reakce umožnila připravit ze zvolených standardů jednoduchých triacylglycerolů příslušné regioizomery. Randomizační reakci bylo možné použít pro jakýkoli počet a druh jednoduchých standardů triacylglycerolů. Tato reakce byla ověřena na reálných vzorcích rostlinných olejů a dále byla používána k přípravě různých syntetických směsí regioizomerů. Jednotlivé triacylglyceroly, které byly separovány při analýzách, byly identifikovány hmotnostním spektrometrem s chemickou ionizací za atmosférického tlaku (APCI-MS). Pro identifikované triacylglyceroly byly popsány významné fragmentové ionty pozorované v APCI hmotnostních spektrech a byla určena převládající mastná kyselina v poloze sn-2. Pomocí popsaných fragmentových iontů bylo uskutečněno srovnání pěti různých hmotnostních spektrometrů. Bylo zjištěno, že vliv odlišných typů hmotnostních analyzátorů byl nižší ve srovnání s efektem počtu dvojných vazeb, jejich polohy na acylovém řetězci a regiospecifické distribuci acylových řetězců na skeletu glycerolu.	cze
dc.description.abstract-translated	This dissertation thesis deals with the analysis of complex triacylglycerol mixtures. Triacylglycerols constitute an important part of our food, these mixtures play a significant role in many biological processes in the human body. This work summarizes the results obtained in the separation and subsequent identification of triacylglycerols and their regioisomers contained in vegetable oils, animal fats and randomization mixtures. Results were presented in four publications in international scientific journals. Triacylglycerols may differ in many parameters. In nature, triacylglycerol combinations form very complex mixtures, which cannot be identified without their previous separation. To obtain maximum number of separated triacylglycerols, chromatographic conditions were optimized in the silver-ion chromatographic system. The mobile phase composition and the length of the column were found to have a significant influence on the efficiency of triacylglycerols separation, especially of their regioisomers. The retention behavior of triacylglycerols and their regioisomers in vegetable oils, animal fats and randomization mixtures were described. Further, the retention behavior of cis-/trans- isomers and triacylglycerols containing unusual fatty acids was described as well. The separation of complex mixtures of natural triacylglycerols were studied using off-line two-dimensional chromatography. The fraction collection was carried out in non-aqueous reversed-phase system and their subsequent separation was carried out in the silver-ion system. The orthogonality of both separation systems was tested for natural samples of triacylglycerols and their regioisomers, which contained fatty acids with different acyl chain lengths, number, position and geometry of double bonds and different regiosomeric position of fatty acids on the glycerol skeleton. Off-line twodimensional chromatography of both complementary modes yielded better chromatographic selectivity, which led to a higher number of identified triacylglycerols. The optimization of the randomization reaction conditions enabled to prepare the regioisomers from the chosen standards of simple triacylglycerols. The randomization reaction could be used for any number and type of simple triacylglycerol standards. This reaction was verified on real samples of vegetable oils and it was also used for prepare of individual synthetic mixtures of regioisomers. Individual triacylglycerols, which were separated in the analyses, were identified using mass spectrometer with atmospheric pressure chemical ionization (APCI-MS). For identified triacylglycerols significant fragment ions observed in APCI mass spectra of triacylglycerols were described and prevailing fatty acids in position sn-2 were determined. The comparison of five mass spectrometers was realized by using the described fragment ions. It was found that the effect of differences in mass spectrometers was lower in comparison with the effect of double bonds, their position on the acyl chains and regiospecifity distribution of acyl chains on glycerol skeleton.	eng
dc.description.defence	Předseda komise představil dizertantku a seznámil komisi s jejími základními životopisnými údaji. Vedoucí dizertační práce a vedoucí pracoviště přednesli svá kladná doporučení k obhajobě dizertace. Následně dizertantka seznámila přítomné se stručným výkladem své práce. Dále oponenti přednesli své posudky a dizertantka se vyjádřila k připomínkám a dotazům oponentů. Konstatováno, že zvenčí nepřišly žádné písemné připomínky. Následovala diskuse k práci: - Dr. Řezanka: rozdíl mezi tuky a oleji, pojmy rostlinný olej x živočišný tuk - prof. Holčapek: vysvětlení podílu práce dizertantky na publikacích - prof. Jandera: upřesnění doby 2D-off-line HPLC, vysvětlení pojmu ortogonalita systémů, otázka vlivu teplot na retenci - doc. Valterová: hodnocení nutričních vlastností tuků různých zvířat. Následovala diskuse komise v neveřejné části - jazykové nedostatky - a tajné hlasování komise. Nakonec dizertantka byla seznámena s výsledkem obhajoby.	cze
dc.description.department	Katedra analytické chemie	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	84 s. + teze	cze
dc.format.extent	2281281 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.identifier	Univerzitní knihovna (studovna)	cze
dc.identifier.signature	D27698	cze
dc.identifier.stag	20328	cze
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/49083
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Práce bude přístupná pouze v rámci univerzity od 12.11.2022	cze
dc.subject	triacylglyceroly	cze
dc.subject	regioizomery	cze
dc.subject	randomizace	cze
dc.subject	rostlinné oleje	cze
dc.subject	živočišné tuky	cze
dc.subject	argentační chromatografie	cze
dc.subject	hmotnostní spektrometrie	cze
dc.subject	chemická ionizace za atmosférického tlaku	cze
dc.subject	triacylglycerols	eng
dc.subject	regioisomers	eng
dc.subject	randomization	eng
dc.subject	plant oils	eng
dc.subject	animal fats	eng
dc.subject	silver-ion chromatography	eng
dc.subject	mass spectrometry	eng
dc.subject	atmospheric pressure chemical ionization	eng
dc.thesis.degree-discipline	Analytická chemie	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Ph.D.	cze
dc.thesis.degree-program	Analytická chemie	cze
dc.title	HPLC/MS charakterizace regioizomerních směsí triacylglycerolů	cze
dc.title.alternative	HPLC/MS characterization of triacylglycerol regioisomeric mixtures	eng
dc.type	disertační práce	cze
dspace.entity.type	Publication