Vývoj a optimalizace podmínek vazby sfingolipid ceramid N-deacylázy na magnetické mikročástice

Abstract

Předložená diplomová práce byla zaměřena na vývoj a optimalizaci magnetického nosiče s imobilizovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Pro katalýzu byl vybrán vhodný porézní magnetický nosič s hydroxylovou funkční skupinou. U připraveného nosiče jsme jeho enzymovou aktivitu charakterizovaly pomocí specifických substrátů Gg4Cer (gangliotetraosyl ceramid), který byl použit pro hydrolytickou reakci a lyso-Gb3Cer (lyso-ceramid trihexosid), který byl použit pro syntetickou reakci. U tohoto nosiče byla také testována operační a skladovací stabilita. Další část diplomové práce byla zaměřena na porovnávání enzymové aktivity solubilní a imobilizované formy Sfingolipid ceramid N-deacylázy v závislosti na teplotě a složení reakčního média. Byly tak určeny vhodné podmínky pro reakci katalyzovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Dále naměřené hodnoty byly použity ke stanovení KM pro substrát Gg4Cer (lyso-Gb3Cer). Vzorky byly analyzovány metodou chromatografie na tenké vrstvě s denzitometrickým vyhodnocením a též hmotností spektrometrií.