Produkce stafylokokových enterotoxinů B a H a jejich detekce

Abstract

Staphylococcus aureus je významným původcem alimentárních intoxikací. Tyto intoxikace jsou způsobeny enterotoxiny, které Staphylococcus aureus produkuje. V naší práci je zkoumán vliv kultivačního média, teploty a pH na produkci stafylokokových enterotoxinů. K experimentu byly použity produkční kmeny Staphylococcus aureus, u kterých bylo metodou PCR ověřeno, že obsahují gen pro produkci enterotoxinů B nebo H. Za optimálních podmínek byla provedena kultivace kmenů Staphylococcus aureus a vyprodukované SE byly přečištěny pomocí TRICIN-SDS-PAGEelektroforézy s následnou imunodetekcí - Western Blotting. Detekční limity pro tuto metodu byly stanoveny pro SEB na 0,1 ?g/ml vzorku, pro SEH na 5,6 ?g/ml. Byla také provedena metoda RPLA pro ověření produkce SEB a porovnána s výsledky Western blottingu. Vliv pH byl sledován s použitím kyseliny chlorovodíkové, mléčné a octové a hydroxidu sodného. Vliv teploty byl sledován v rozmezí 5 - 50 °C. Pro vliv kultivačního média byla použita kultivace v BHI bujónu a fyziologickém roztoku. Bylo zjištěno, že stafylokokový enterotoxin B byl produkován již při 5 °C, stafylokokový enterotoxin H až při teplotě pokojové (25 °C). Rozmezí pH pro produkci SEH i SEB bylo od 4.03 do 10.60.