Průkaz vybraných patogenů způsobujících kongenitální pneumonii u nedonošených novorozenců pomocí molekulárně biologických metod - Baranová, Lucia (Univerzita Pardubice, 2008)
Včasná diagnostika kongenitálních pneumonií způsobených Chlamyda trachomatis, Ureaplasma urealyticum a Ureaplasma parvum je nezbytná z důvodu nedostatečně vyvinutého imunitního systému u předčasně narozených novorozenců. Snahou naší práce proto bylo urychlení detekce DNA těchto patogenů, aby mohla být u těchto pacientů co nejrychleji zahájena cílená antibiotická léčba. Doposud používaná metoda pro průkaz DNA Ch. trachomatis a Ureaplasma spp. je časově náročná (24 až 48 hodin), např. úvodní inkubace při izolaci DNA trvá 14 až 16 hodin. Cílem naší práce proto bylo zkrácení izolačního postupu bez snížení citlivosti detekce DNA. Výsledkem našich pokusů byla optimalizace izolace DNA trvající pouze 1,5 hodiny pro Ch. trachomatis a 3 hodiny pro Ureaplasma spp.. V práci jsme se rovněž zabývali vlivem rychlosti centrifugace. Tento vliv byl pozorován pouze při průkazu DNA Ch. trachomatis, kde 8000 otáček za minutu zlepšovalo možnost jejího záchytu. Ke značnému zrychlení diagnostiky ureaplazmat přispělo i zavedení komerční real-time PCR s využitím přístroje Rotor-Gene 6000, která plně nahradila používanou in-house nested PCR. Dále jsme se zaměřili na preanalytickou fázi vyšetření, tj. určení stability vzorků před a po dodání do laboratoře. V případě aspirátů z dolních dýchacích cest a žaludku u novorozenců je optimální dodání v co nejkratší době, nejpozději do 24 hodin při 4 °C. V případě potřeby (např. přes víkend) je možné zamražení na -20 °C.
Detection of selected pathogens causing congenital pneumonia in preterm neonates by molecular biology methods
Keywords: congenital infection; preanalytical phase; kongenitální infekce; Chlamydia trachomatis; Ureaplasma urealyticum; Ureaplasma parvum; DNA; real-time PCR; preanalytická fáze