Detekce enzymové aktivity proteinkináz imobilizovaných na magnetických částicích

Abstract

Cílem diplomové práce bylo zavést metodu elektrochemického stanovení aktivity enzymu proteinkinázy A, a to solubilní a imobilizované na magnetických částicích. Stanovení bylo založeno na square-wave voltametrické analýze nanočástic koloidního zlata (AuNPs), které byly použity jako elektroaktivní částice selektivně navázané na fosforylovaný substrát. Solubilní i imobilizovaná forma proteinkinázy A byla použita k in vitro fosforylaci Kemptide a biotin-Kemptide. Účinnost fosforylace byla ověřena také pomocí metody MALDI-Orbitrap hmotnostní spektrometrie.