Digitální knihovnaUPCE
 

Stanovení aktivity laktátdehydrogenasy jako markeru cytotoxicity

Diplomová práce
Náhled

Datum publikování

2015

Vedoucí práce

Oponent

Název časopisu

Název svazku

Vydavatel

Univerzita Pardubice

Abstrakt

Laktátdehydrogenáza (LDH) je důležitý cytoplasmatický enzym, který zodpovídá za reverzibilní přeměnu pyruvátu na laktát. LDH je přítomna prakticky ve všech buňkách těla a do krevního oběhu se může uvolňovat již při malém tkáňovém poškození. Strukturně je molekula LDH tvořena dvěma podjednotkami. Vzájemnou kombinací těchto podjednotek vzniká 5 izoenzymů laktátdehydrogenázy. Nejčastější metodou stanovení LDH je spektrofotometrické stanovení, kdy měříme pokles absorbance LDH při 340 nm. Tento pokles je způsobený oxidací NADH a je přímo úměrný aktivitě laktátdehydrogenázy ve vzorku. Naším cílem bylo zavést stanovení LDH pomocí komerční sady a vedle toho optimalizovat vlastní postup pro stanovení aktivity tohoto enzymu. Při optimalizaci jsme testovali vliv přítomnosti draselno-fosfátového, sodno-fosfátového pufru a TRIS pufru na aktivitu LDH detekovanou ve vzorcích. Ke stanovování aktivity LDH v biologickém materiálu jsme využili homogenát potkaních jater, kde jsme porovnávali naměřené hodnoty námi optimalizovanou metodou s výsledky získanými pomocí komerční sady. Dále jsme se v této diplomové práci věnovali vlivu teploty na aktivitu LDH při skladování vzorku na ledu, při pokojové teplotě a v mrazáku. V poslední části práce jsme sledovali změnu aktivity LDH v médiu u ledinných HK-2 buněk po jejich inkubaci s acetaminofenem. Na základě získaných poznatků shrnujeme, že jsme zavedli novou metodu stanovení aktivity LDH, která je například vhodná pro charakterizaci poškození buněk a je srovnatelná s komerčně dodávanou sadou.

Rozsah stran

70 s.

ISSN

Trvalý odkaz na tento záznam

Projekt

Zdrojový dokument

Vydavatelská verze

Přístup k e-verzi

Práce není přístupná

Název akce

ISBN

Studijní obor

Analýza biologických materiálů

Studijní program

Speciální chemicko-biologické obory

Signatura tištěné verze

D32385

Umístění tištěné verze

Univerzitní knihovna (studovna)

Přístup k tištěné verzi

Klíčová slova

lactate dehydrogenase, enzymes, cytotoxicity, laktátdehydrogenáza, enzymy, cytotoxicita

Endorsement

Review

item.page.supplemented

item.page.referenced