Stanovení aktivity laktátdehydrogenasy jako markeru cytotoxicity
Diplomová práceOmezený přístupDatum publikování
2015
Autoři
Vedoucí práce
Oponent
Název časopisu
Název svazku
Vydavatel
Univerzita Pardubice
Abstrakt
Laktátdehydrogenáza (LDH) je důležitý cytoplasmatický enzym, který zodpovídá za reverzibilní přeměnu pyruvátu na laktát. LDH je přítomna prakticky ve všech buňkách těla a do krevního oběhu se může uvolňovat již při malém tkáňovém poškození. Strukturně je molekula LDH tvořena dvěma podjednotkami. Vzájemnou kombinací těchto podjednotek vzniká 5 izoenzymů laktátdehydrogenázy. Nejčastější metodou stanovení LDH je spektrofotometrické stanovení, kdy měříme pokles absorbance LDH při 340 nm. Tento pokles je způsobený oxidací NADH a je přímo úměrný aktivitě laktátdehydrogenázy ve vzorku.
Naším cílem bylo zavést stanovení LDH pomocí komerční sady a vedle toho optimalizovat vlastní postup pro stanovení aktivity tohoto enzymu. Při optimalizaci jsme testovali vliv přítomnosti draselno-fosfátového, sodno-fosfátového pufru a TRIS pufru na aktivitu LDH detekovanou ve vzorcích. Ke stanovování aktivity LDH v biologickém materiálu jsme využili homogenát potkaních jater, kde jsme porovnávali naměřené hodnoty námi optimalizovanou metodou s výsledky získanými pomocí komerční sady. Dále jsme se v této diplomové práci věnovali vlivu teploty na aktivitu LDH při skladování vzorku na ledu, při pokojové teplotě a v mrazáku. V poslední části práce jsme sledovali změnu aktivity LDH v médiu u ledinných HK-2 buněk po jejich inkubaci s acetaminofenem. Na základě získaných poznatků shrnujeme, že jsme zavedli novou metodu stanovení aktivity LDH, která je například vhodná pro charakterizaci poškození buněk a je srovnatelná s komerčně dodávanou sadou.
Rozsah stran
70 s.
ISSN
Trvalý odkaz na tento záznam
Projekt
Zdrojový dokument
Vydavatelská verze
Přístup k e-verzi
Práce není přístupná
Název akce
ISBN
Studijní obor
Analýza biologických materiálů
Studijní program
Speciální chemicko-biologické obory
Signatura tištěné verze
D32385
Umístění tištěné verze
Univerzitní knihovna (studovna)
Přístup k tištěné verzi
Klíčová slova
lactate dehydrogenase, enzymes, cytotoxicity, laktátdehydrogenáza, enzymy, cytotoxicita