Porovnání metod pro stanovení proteinů v biologickém materiálu
Diplomová práceOmezený přístupDatum publikování
2015
Autoři
Vedoucí práce
Oponent
Název časopisu
Název svazku
Vydavatel
Univerzita Pardubice
Abstrakt
Proteiny jsou řazeny mezi základní živiny všech živých organismů, které jsou složeny z aminokyselinových zbytků. Proteiny se vyznačují celou řadou důležitých funkcí, například stavební, ochrannou nebo transportní. V současné době existují různé metody, které jsou využívány pro stanovení koncentrace proteinů v různých vzorcích. Tyto metody jsou nejčastěji spektrofotometrické, ale také imunochemické či fluorimetrické. Cílem naší práce bylo optimalizovat dvě zvolené metody pro stanovení koncentrace proteinů. Jednalo se o metodu dle Bradforda a o metodu s kyselinou bicinchoninovou. Dalším cílem naší práce bylo porovnat obě metody mezi sebou, charakterizovat jejich využití u biologických vzorků a prokázat možné interferující látky.
Pro optimalizaci obou metod jsme připravili kalibrační řadu standardního hovězího albuminu. Z naměřené absorbance kalibrační řady jsme určili lineární rozsah kalibrace BSA v rozmezí koncentrací od 0 do 100 g/ml. Dále jsme hledali optimální teplotu či dobu inkubace pro testování stability vznikajícího komplexu. Pro metodu dle Bradforda jsme zvolili jako optimální laboratorní teplotu. U metody s kyselinou bicinchoninovou se jevila optimální teplota 37 °C, ale z důvodu co nejbližšího porovnání metod jsme využívali teplotu laboratorní. Obě metody jsme využili také pro stanovení koncentrace proteinů v biologickém materiálu, kterým byly homogenáty myší jaterní a ledvinné tkáně. V rámci stanovení interference jsme použili několik aminokyselin a látek s biologickým účinkem. Všechny aminokyseliny jsme vyhodnotili jako látky neinterferující u obou metod. V případě látek s biologickým účinkem jsme prokázali interferenci u metody s kyselinou bicinchoninovou; jednalo se o quercetin a acetaminofen, u něhož jsme prokázali interferenci u koncentrací nad 1 mol/l. Na základě našich výsledků lze říci, že obě metody jsou jednoduché, rychlé a vhodné pro stanovení koncentrace proteinů ve standardních vzorcích, v případě předpokládané interference je ale vhodnější použít metodu dle Bradforda.
Rozsah stran
95 s.
ISSN
Trvalý odkaz na tento záznam
Projekt
Zdrojový dokument
Vydavatelská verze
Přístup k e-verzi
Práce není přístupná
Název akce
ISBN
Studijní obor
Analýza biologických materiálů
Studijní program
Speciální chemicko-biologické obory
Signatura tištěné verze
D32393
Umístění tištěné verze
Univerzitní knihovna (studovna)
Přístup k tištěné verzi
Klíčová slova
Protein, Bradford protein assay, Bicinchoninic acid protein assay, interference, proteiny, kyselina bicinchoninová, metoda dle Bradforda, interference