Hodnocení aktivity peritoneálních makrofágů

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá stanovením tří cytokinů produkovaných peritoneálními makrofágy potkana - TNF?, IL-1? a IL-6 ve vztahu k rozdílnému přístupu operačního výkonu - laparotomickému či laparoskopickému. Byla měřena bazální produkce uvedených cytokinů a jejich produkce po stimulaci makrofágů bakteriálním lipopolysacharidem (LPS). Izolace buněk z peritonea probíhala ve dvou intervalech - 24 nebo 72 hodin po operaci. Vlastní analýze předcházela vždy 24 hodinová kultivace s, resp. bez LPS. Optimální koncentrace LPS vhodné pro stimulaci peritoneálních makrofágů bylo nutno experimentálně docílit. Zjištěná optimální koncentrace LPS byla 0,1 ?g/ml. Hladina cytokinů byla stanovena pomocí sendvičové ELISA metody. V teoretické části je popsána organizace imunitního systému a funkce jeho jednotlivých složek v imunitní odpovědi s důrazem na úlohu makrofágů. Významná část je věnována roli cytokinů v modulaci imunitní odpovědi. Dále je podána literární rešerše o dějích v peritoneální oblasti ve vztahu k laparotomickému či laparoskopickému zásahu do abdominální krajiny a zhodnocení systémové a lokální imunitní odpovědi, která tyto chirurgické zákroky doprovází. Experimentální část je věnována popisu principu EIA metod se zaměřením na ELISA metody a její variace. Dále je v této části uveden optimalizovaný postup izolace a kultivace peritoneálních makrofágů a vlastního stanovení jimi produkovaných cytokinů metodou ELISA. Výsledková část obsahuje postup optimalizace koncentrace LPS vhodného pro stimulaci peritoneálních makrofágů. Dále zahrnuje grafickou a slovní dokumentaci bazální i stimulované produkce jednotlivých cytokinů makrofágy izolovanými 24, resp. 72 hodin po zákroku. Bazální produkce cytokinů byla signifikantně vyšší u laparoskopované skupiny, nejvyšší produkci cytokinů stimulovanými makrofágy vykazovala naopak skupina po laparotomii. Zhodnocení získaných výsledků je rozebíráno v diskusi.