Vývoj bioaktivních nosičů pro pokročilou diagnostiku Alzheimerovy choroby

Vajrychová, Marie

dc.contributor.advisor	Bílková, Zuzana	cze
dc.contributor.author	Vajrychová, Marie
dc.date.accessioned	2011-07-11T21:44:20Z
dc.date.available	2011-07-11T21:44:20Z
dc.date.issued	2011
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10195/39575
dc.description.abstract	V diplomové práci jsme ověřovali účinnost vazby nespecifického IgG izolované z lidského séra, specifických polyklonálních anti-ovalbuminových protilátek na SiMAG/PGL a SiMAG-IDA/Co3+ mikročástice. Získané poznatky jsme uplatnili při imobilizaci monoklonálních specifických protilátek proti Abeta peptidům (38 - 42 aminokyselin) a lidskému tau proteinu na SiMAG/PGL a SiMAG-IDA/Co3+ mikročástice. Účinnost vazby jsme hodnotili metodou SDS-PAGE. Zároveň jsme také hledali optimální podmínky pro imobilizaci protilátek na vybrané nosiče, tj. doba a teplota imobilizace. Ověřovali jsme také vliv stáří protilátky na vazbu na mikročástice. U nespecifického IgG jsme ověřovali čistotu a molekulovou hmotnost deklarovanou výrobcem. U specifických polyklonálních a monoklonálních protilátek jsme účinnost vazby na mikročástice ověřovali také izolací antigenu pomocí připravených imunosorbentů a jeho následného uvolnění z vazby kyselou elucí. Kontrolu úspěšnosti izolace jsme prováděli pomocí metod SDS-PAGE a Tris/tricin Urea SDS-PAGE. Na vybrané nosiče SiMAG/PGL a SiMAG-IDA/Co3+ jsme imobilizovali také kinázy, které hrají významnou roli v patogenezi Alzheimerovy choroby, kinázu GSK-3 (GSK-3beta His Tag) a MAP kinázu. Aktivitu vázaných kináz jsme ověřovali fosforylací nízkomolekulárních substrátů specifických pro dané kinázy. Ověřovali jsme nový substrát pro GSK-3, neboť standardně používaný CREB peptid se již nevyrábí. Detekci fosforylace jsme prováděli MS analýzou MALDI/TOF/TOF. Kinázu GSK-3 a MAP kinázu jsme použili pro fosforylaci lidského tau proteinu. Nejprve jsme tau protein fosforylovali solubilní MAP kinázou a následně solubilní a vázanou GSK-3 (GSK-3beta His Tag). Ve výsledných MS spektrech jsme sledovali moţná fosforylační místa tau proteinu.	cze
dc.format	138 s.	cze
dc.format.extent	1330486 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Práce není přístupná	cze
dc.subject	Alzheimerova choroba	cze
dc.subject	beta amyloid	cze
dc.subject	tau protein	cze
dc.subject	fosforylace	cze
dc.subject	kináza GSK-3	cze
dc.subject	MAP kináza	cze
dc.subject	biomarker	cze
dc.subject	Alzheimer disease	eng
dc.subject	beta amyloid	eng
dc.subject	tau protein	eng
dc.subject	phosphorylation	eng
dc.subject	GSK-3 kinase	eng
dc.subject	MAP kinase	eng
dc.subject	biomarker	eng
dc.title	Vývoj bioaktivních nosičů pro pokročilou diagnostiku Alzheimerovy choroby	cze
dc.title.alternative	Development of bioactive carriers for advanced diagnostic of Alzheimer´s disease	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dc.contributor.referee	Hernychová, Lenka	cze
dc.date.accepted	2011	cze
dc.description.abstract-translated	We verified an efficiency of immobilization human serum IgG, specific polyclonal anti?ovalbumin antibodies to SiMAG/PGL and SiMAG-IDA/Co3+ carriers. We performed immobilization of specific monoclonal antibodies against beta amyloid and human tau protein on SiMAG/PGL and SiMAG-IDA/Co3+ microparticles based on theoretical and practical experience. The efficiency of binding we evaluated by SDS-PAGE method. Currently we found optimal conditions of immobilization antibodies on selected carriers, time and temperature. We verified an influence of the age of antibody solution to the immobilization efficiency. We judged purity and molecular weight of nonspecific IgG proclaimed by producer. We checked the binding capacity of prepared carriers by antigen capturing. We evaluated the antigen capturing efficiency by SDS-PAGE and Tris/tricin Urea SDS-PAGE method. We immobilized enzymes kinases on SiMAG/PGL and SiMAG?-DA/Co3+ carriers. We elected GSK-3 kinase (GSK-3beta His Tag) and MAP kinase because of significant role in Alzheimer disease. We evaluated the activity of immobilized kinases by phosphorylation of low molecular specific substrate. We verified new GSK-3 substrate because of no provided CREB peptide as specific substrate for GSK-3 on the market. We estimated the level of phosphorylation by mass spectrometry MALDI/TOF/TOF. We applied selected kinases for tau protein phosphorylation. At first we perform phosphorylation by soluble MAP kinase and then by soluble and immobilized GSK-3 kinase. In the agreement with theoretical potential phosphorylation sites we confirmed the phosphorylation of tau protein.	eng
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.identifier.signature	D23710
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze