| dc.contributor.advisor |
Slováková, Marcela |
cze |
| dc.contributor.author |
Panýrová, Martina
|
|
| dc.date.accessioned |
2010-07-03T13:14:25Z |
|
| dc.date.available |
2010-07-03T13:14:25Z |
|
| dc.date.issued |
2010 |
|
| dc.identifier |
Univerzitní knihovna (sklad) |
cze |
| dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/10195/36522 |
|
| dc.description.abstract |
V diplomové práce byly provedeny optimalizace podmínek fosforylace substrátu CREB fosfopeptidu (cAMP Response Element Binding Protein) enzymem GSK-3 a substrátu TH 24 - 33 (Tyrosine hydroxylase 24 - 33) enzymem MAPK- His tag a optimalizace podmínek imobilizace obou enzymů na superparamagnetické částice. Mezi sledované parametry patřily teplota a délka fosforylace. GSK-3 byla imobilizována na magnetické nosiče SiMAG-IDA/Nickel, SiMAG-PGL, SiMAG-IDA/Co3+ a BcMAG Aldehyde magnetické částice. MAPK- His tag byla úspěšně imobilizována na SiMAG-IDA/Co3+ a BcMAG Aldehyde magnetické částice. U všech nosičů pro GSK-3 byla sledována skladovací stabilita, u některých případně operační stabilita. Nejstabilnější byla imobilizace GSK-3 na SiMAG-IDA/Co3+ sledovaná po jednom týdnu. GSK-3 i MAPK-His tag byly pouţity pro přípravu tzv. hyperfosforylovaného tau proteinu, jako standardu. Tau protein byl štěpen imobilizovaným trypsinem. Fosforylace peptidových substrátů byly potvrzeny pomocí MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie. Následnou analýzou MALDI TOF/TOF se potvrdila fosforylace u tau peptidu 45 - 67 s Mr 2471 Da. |
cze |
| dc.format |
104 s., 41 příloha |
cze |
| dc.format.extent |
5410833 bytes |
cze |
| dc.format.mimetype |
application/pdf |
cze |
| dc.language.iso |
cze |
|
| dc.publisher |
Univerzita Pardubice |
cze |
| dc.rights |
Práce není přístupná |
cze |
| dc.subject |
Alzheimerova nemoc |
cze |
| dc.subject |
tau protein |
cze |
| dc.subject |
GSK-3 |
cze |
| dc.subject |
MAPK |
cze |
| dc.subject |
fosforylace |
cze |
| dc.subject |
imobilizace kináz |
cze |
| dc.subject |
Alzheimer´s disease |
eng |
| dc.subject |
tau protein |
eng |
| dc.subject |
GSK-3 |
eng |
| dc.subject |
MAPK |
eng |
| dc.subject |
phosphorylation |
eng |
| dc.subject |
kinase immobilization |
eng |
| dc.title |
Optimalizace podmínek vazby kináz GSK-3 a MAPK na superparamagnetické částice |
cze |
| dc.title.alternative |
Optimization of GSK-3 and MAP kinases immobilization to superparamagnetic particles |
eng |
| dc.type |
diplomová práce |
cze |
| dc.date.accepted |
2010 |
cze |
| dc.description.abstract-translated |
In this diploma thesis there were optimized conditions of phosphorylation for substrates CREB phosphopeptide by enzyme GSK-3 and for TH 24 - 33 by enzyme MAPK-His tag, and further optimization of conditions for GSK-3 and MAPK immobilization on different superparamagnetic particles. Two parameters were tested, temperature and time of phosphorylation. For immobilization of GSK-3 these superparamagnetic particles were applied: SiMAG-IDA/Nickel, SiMAG-PGL, SiMAG-IDA/Co3+ and BcMAG Aldehyde. MAPK-His tag was successfully immobilized on SiMAG-IDA/Co3+ and BcMAG Aldehyde superparamagnetic particles. Storage and operational stability of each immobilized GSK-3 reactors were monitored. The most stable immobilized GSK-3 reactor was prepared on SiMAG-IDA/Co3+. GSK-3 and MAPK-His tag were applied for preparing so-called hyperphosphorylated tau protein, which occurs in patients with Alzheimer´s disease. Phosphorylation of peptide substrates and tau proteins were detected by MALDI-TOF and MALDI-TOF/TOF mass spectrometry. |
eng |
| dc.description.department |
Katedra biologických a biochemických věd |
cze |
| dc.thesis.degree-discipline |
Analýza biologických materiálů |
cze |
| dc.thesis.degree-name |
Mgr. |
cze |
| dc.thesis.degree-grantor |
Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická |
cze |
| dc.identifier.signature |
D21802 |
cze |
| dc.identifier.signature |
D21802 |
|
| dc.thesis.degree-program |
Speciální chemicko-biologické obory |
cze |
| dc.description.defence |
1) Prezentace výsledků DP 2) Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3) Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP |
cze |
| dc.description.grade |
Dokončená práce s úspěšnou obhajobou |
cze |
