Digitální knihovnaUPCE
 

Optimalizace použití trypsinu imobilizovaného na magnetických mikročásticích pro proteomické účely

Diplomová práce

Abstrakt

Trypsin štěpí proteiny s vysokou specifikou proteinové řetězce v místech peptidové vazby na C-konci argininu a lysinu. Vznikající peptidy jsou vhodné svojí délkou a svým složením pro analýzu hmotnostní spektrometrií. Z tohoto důvodu je trypsin jedním z nejvyužívanějších proteolytických enzymů v proteomice. Cílem této diplomové práce bylo otestovat účinnost štěpení trypsinu imobilizovaného na magnetické mikročástice v porovnání s účinností trypsinu v roztoku. Současně byly hledány optimální podmínky k efektivnímu rozštěpení proteinů s ohledem na reakční dobu. Trypsin byl imobilizován na magnetické mikročástice a použit pro štěpení vzorků obsahujících standardní proteiny - cytochrom C, a-casein, hovězí sérový albumin a jejich směs. Efektivita štěpení imobilizovaným trypsinem byla sledována v závislosti na různém poměru enzymu a proteinu, různé reakční době a na změnách složení štěpícího pufru. Výsledky byly porovnávány se štěpením pomocí nevázaného trypsinu. Produkty štěpení byly v obou případech kvantitativně a kvalitativně analyzovány technikami MALDI-TOF a RP-HPLC. Vyhodnocením výsledků bylo zjištěno, že štěpení imobilizovaným trypsinem v krátkých časových je efektivnější než trypsinem nevázaným. Ovšem např. v případě štěpení hovězího sérového albuminu výsledky svědčí o větší efektivitě štěpení nevázaným trypsinem, a to i v krátkých časových intervalech.

Rozsah stran

91 s.

ISSN

Trvalý odkaz na tento záznam

Projekt

Zdrojový dokument

Vydavatelská verze

Přístup k e-verzi

Bez omezení

Název akce

ISBN

Studijní obor

Analýza biologických materiálů

Studijní program

Speciální chemicko-biologické obory

Signatura tištěné verze

D20333

Umístění tištěné verze

Univerzitní knihovna (sklad)

Přístup k tištěné verzi

Klíčová slova

magnetic microparticles, immobilized enzyme, Proteins, Mass spectrometry, magnetické mikročástice, imobilizace enzymu, Trypsin, proteiny, Hmotnostní spektrometrie

Endorsement

Review

item.page.supplemented

item.page.referenced