Optimalizace použití trypsinu imobilizovaného na magnetických mikročásticích pro proteomické účely
Diplomová práceOtevřený přístupDatum publikování
2009
Autoři
Vedoucí práce
Oponent
Název časopisu
Název svazku
Vydavatel
Univerzita Pardubice
Abstrakt
Trypsin štěpí proteiny s vysokou specifikou proteinové řetězce v místech peptidové vazby na C-konci argininu a lysinu. Vznikající peptidy jsou vhodné svojí délkou a svým složením pro analýzu hmotnostní spektrometrií. Z tohoto důvodu je trypsin jedním z nejvyužívanějších proteolytických enzymů v proteomice. Cílem této diplomové práce bylo otestovat účinnost štěpení trypsinu imobilizovaného na magnetické mikročástice v porovnání s účinností trypsinu v roztoku. Současně byly hledány optimální podmínky k efektivnímu rozštěpení proteinů s ohledem na reakční dobu. Trypsin byl imobilizován na magnetické mikročástice a použit pro štěpení vzorků obsahujících standardní proteiny - cytochrom C, a-casein, hovězí sérový albumin a jejich směs. Efektivita štěpení imobilizovaným trypsinem byla sledována v závislosti na různém poměru enzymu a proteinu, různé reakční době a na změnách složení štěpícího pufru. Výsledky byly porovnávány se štěpením pomocí nevázaného trypsinu. Produkty štěpení byly v obou případech kvantitativně a kvalitativně analyzovány technikami MALDI-TOF a RP-HPLC. Vyhodnocením výsledků bylo zjištěno, že štěpení imobilizovaným trypsinem v krátkých časových je efektivnější než trypsinem nevázaným. Ovšem např. v případě štěpení hovězího sérového albuminu výsledky svědčí o větší efektivitě štěpení nevázaným trypsinem, a to i v krátkých časových intervalech.
Rozsah stran
91 s.
ISSN
Trvalý odkaz na tento záznam
Projekt
Zdrojový dokument
Vydavatelská verze
Přístup k e-verzi
Bez omezení
Název akce
ISBN
Studijní obor
Analýza biologických materiálů
Studijní program
Speciální chemicko-biologické obory
Signatura tištěné verze
D20333
Umístění tištěné verze
Univerzitní knihovna (sklad)
Přístup k tištěné verzi
Klíčová slova
magnetic microparticles, immobilized enzyme, Proteins, Mass spectrometry, magnetické mikročástice, imobilizace enzymu, Trypsin, proteiny, Hmotnostní spektrometrie