Význam regulací signální cesty proteinu p53 v protinádorové léčbě: inhibice ATM
Diplomová práceOtevřený přístupDatum publikování
2009
Autoři
Vedoucí práce
Oponent
Název časopisu
Název svazku
Vydavatel
Univerzita Pardubice
Abstrakt
Cílem této práce bylo sledování apoptózy a molekulárních změn vyvolaných mitoxantronem a mitoxantronem v kombinaci s kofeinem u lidských nádorových buněk. Jako modelový systém byla zvolena buněčná linie MOLT-4, odvozená od lidské T-lymfocytární leukémie. Nejprve jsme sledovali proliferační aktivitu buněk MOLT-4 po vystavení různým dávkám mitoxantronu a následně jsme sledovali proliferační aktivitu buněk vystavených působení mitoxantronu společně s kofeinem, jakožto inhibitorem ATM kinázy. Podrobnější analýzu ovlivněných buněk jsme provedli pomocí flow-cytometrie. Využívali jsme hodnocení buněčného cyklu pomocí obsahu DNA v buňce a hodnocení apoptózy pomocí duálního značení za použití Annexinu V a propidium jodidu. Dále jsme využívali změn optických parametrů rozptylu světla. Zjistili jsme, že kofein ruší blok v G2 fázi buněčného cyklu a v kombinaci s 0,5 nmol/l mitoxantronem má na buňky protektivní vliv, pozorovatelný zejména po 72 hodinách od ovlivnění. Následně jsme studovali změnu v množství proteinů důležitých při reparaci buňky a regulaci buněčného cyklu po působení cytostatika a inhibitoru ATM kinázy. Zabývali jsme se analýzou proteinu p53 a jeho fosforylovaných forem p53_ser15 a p53_ser392, dále jsme sledovali změnu v množství proteinu p21, ERK1/2 a štěpení laminu B. Pro kontrolu nanášky jsme používali stanovení aktinu. Tyto změny jsme detekovali pomocí elektroforézy následované western blotem zakončeným imunodetekcí. V této práci jsme potvrdili, že kofein zabraňuje fosforylaci proteinu p53 u buněk MOLT-4 a tím snižuje jeho stabilitu. Teoretická část této diplomové práce charakterizuje apoptózu, mechanizmy jejího spuštění a regulace a dále pak regulaci buněčného cyklu zejména na molekulární úrovni. Jsou popsány reparační procesy vyvolané aktivací ATM kinázy po poškození DNA. Popsáno je také působení mitoxantronu a kofeinu a nejsou opomenuty ani metody detekce apoptózy ať už pomocí průtokové cytometrie nebo western blot analýzy.
Rozsah stran
69 s.
ISSN
Trvalý odkaz na tento záznam
Projekt
Zdrojový dokument
Vydavatelská verze
Přístup k e-verzi
Bez omezení
Název akce
ISBN
Studijní obor
Analýza biologických materiálů
Studijní program
Speciální chemicko-biologické obory
Signatura tištěné verze
D20322
Umístění tištěné verze
Univerzitní knihovna (sklad)
Přístup k tištěné verzi
Klíčová slova
apoptosis, ATM kinase, apoptóza, ATM kináza, protein p53