Stanovení oxokyselin odvozených od aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcí

Zobrazit minimální záznam

dc.contributor.advisor Kanďár, Roman
dc.contributor.author Jirošová, Jana
dc.date.accessioned 2008-08-12T07:39:15Z
dc.date.available 2008-08-12T07:39:15Z
dc.date.issued 2008
dc.identifier Univerzitní knihovna (sklad) cze
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10195/29291
dc.description.abstract Oxokyseliny s rozvětveným řetězcem (ketoisovalerát, ketoisokaproát, ketomethylvalerát) jsou prvními produkty metabolismu při odbourávání aminokyselin s rozvětveným řetězcem. Vysoké hladiny oxokyselin s rozvětveným řetězcem v plazmě a krvi můžou způsobit nemoc javorového sirupu. Byla vyvinuta HPLC metoda s fluorescenční detekcí pro stanovení oxokyselin s rozvětveným řetězcem v plazmě a suchých krevních skvrnách. Oxokyseliny byly derivatizovány s o fenylendiaminem. Pro separaci derivátů byla použita chromatografická kolona LiChroCart 125-4 Purospher RP-18e, 5 ?m. Eluce byla provedena v gradientovém módu, kde jako mobilní fáze A byla použita směs methanolu s deionizovanou vodou (55:45, v/v pro plazmu a 50:50, v/v pro suché krevní skvrny) a mobilní fáze B obsahovala 100% methanol. Analytické parametry prezentované metody byly následující: přesnost v sérii, vyjádřená variačním koeficientem, byla v suchých krevních skvnách 3,67% pro KIV, 3,58% pro KIC a 3,18% pro KMV. Kalibrační křivka byla lineární v testovaném rozsahu koncentrací. Správnost vyjádřená výtěžností metody pro suché krevní skvrny KIV, KIC a KMV byla následující: 104,98% (CV 1,79%), 104,00% (CV 3,59%) a 101,99% (CV 4,85%). Vyvinuli jsme jednoduchou a selektivní HPLC metodu s fluorescenční detekcí pro stanovení oxokyselin v suchých krevních skvrnách a v plazmě. cze
dc.format 64 s. cze
dc.format.extent 397520 bytes eng
dc.format.mimetype application/pdf eng
dc.language.iso cze
dc.publisher Univerzita Pardubice cze
dc.rights Bez omezení cze
dc.subject branched-chain keto acids eng
dc.subject ketoisovalerate eng
dc.subject ketoisocaproate eng
dc.subject ketomethylvalerate eng
dc.subject newborn eng
dc.subject dried blood spots eng
dc.subject Plasma eng
dc.subject HPLC eng
dc.subject fluorescence detection eng
dc.subject oxokyseliny s rozvětveným řetězcem cze
dc.subject ketoisovalerát cze
dc.subject ketoisokaproát cze
dc.subject ketomethylvelrát cze
dc.subject nemoc javorového sirupu cze
dc.subject novorozenci cze
dc.subject suché krevní skvrny cze
dc.subject plazma cze
dc.subject fluorescenční detekce cze
dc.title Stanovení oxokyselin odvozených od aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcí cze
dc.title.alternative Determination of keto acids derived from branch chain amino acids using HPLC with fluorescence detection eng
dc.type diplomová práce cze
dc.date.accepted 2008
dc.description.abstract-translated The branched-chain keto acids (ketoisovaleric acid, ketoisocaproic acid and ketomethylvaleric acid) are the first degradation products of these amino acids produced by enzymatic transamination with branched-chain amino acids transaminase. Highly increased concentrations of branched-chain keto acids in human plasma and blood lead to the clinical syndrome of maple syrup urine disease. A HPLC method with fluorescence detection for the measurement of branched-chain keto acids in plasma and dried blood spots has been developed and evaluated. The branched-chain keto acids were derivatized with o-phenylenediamine into 2 quinoxalinol derivatives. The quinoxalinol derivatives were separated by reversed-phase high-performance liquid chromatography using a column LiChroCart 125 4 Purospher RP-18e, 5 ?m with gradient elution. As mobile phase A was used the mixture of methanol and deionized water (55:45, v/v for plasma and 50:50, v/v for dried blood spots) and mobile phase B was used 100% methanol. The analytical performance of the method is satisfactory for clinical trials. The intra-assay coefficients of variation for KIV, KIC, KMV were 3.67%, 3.58% and 3.18% for dried blood spots. The calibration curve was linear with the tested range 0 100 ?mol/l for KIV, KMV, KIC. The recoveries were as follows: 104.98% (CV 1.79%), 104.00% (CV 3.59%) and 101.99% (CV 4.85%) for dried blood spots. We have developed a simple and a selective HPLC method with fluorescence detection for the determination branched-chain keto acids in dried blood spots and plasma. eng
dc.description.department Katedra biologických a biochemických věd cze
dc.thesis.degree-discipline Analýza biologických materiálů cze
dc.thesis.degree-name Mgr. cze
dc.thesis.degree-grantor Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická cze
dc.identifier.signature D18021
dc.thesis.degree-program Speciální chemicko-biologické obory cze
dc.description.grade Dokončená práce s úspěšnou obhajobou cze


Tento záznam se objevuje v následujících kolekcích

Zobrazit minimální záznam

Vyhledávání


Rozšířené hledání

Procházet

Můj účet