Stanovení oxokyselin odvozených od aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcí

Jirošová, Jana

dc.contributor.advisor	Kanďár, Roman
dc.contributor.author	Jirošová, Jana
dc.date.accessioned	2008-08-12T07:39:15Z
dc.date.available	2008-08-12T07:39:15Z
dc.date.issued	2008
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10195/29291
dc.description.abstract	Oxokyseliny s rozvětveným řetězcem (ketoisovalerát, ketoisokaproát, ketomethylvalerát) jsou prvními produkty metabolismu při odbourávání aminokyselin s rozvětveným řetězcem. Vysoké hladiny oxokyselin s rozvětveným řetězcem v plazmě a krvi můžou způsobit nemoc javorového sirupu. Byla vyvinuta HPLC metoda s fluorescenční detekcí pro stanovení oxokyselin s rozvětveným řetězcem v plazmě a suchých krevních skvrnách. Oxokyseliny byly derivatizovány s o fenylendiaminem. Pro separaci derivátů byla použita chromatografická kolona LiChroCart 125-4 Purospher RP-18e, 5 ?m. Eluce byla provedena v gradientovém módu, kde jako mobilní fáze A byla použita směs methanolu s deionizovanou vodou (55:45, v/v pro plazmu a 50:50, v/v pro suché krevní skvrny) a mobilní fáze B obsahovala 100% methanol. Analytické parametry prezentované metody byly následující: přesnost v sérii, vyjádřená variačním koeficientem, byla v suchých krevních skvnách 3,67% pro KIV, 3,58% pro KIC a 3,18% pro KMV. Kalibrační křivka byla lineární v testovaném rozsahu koncentrací. Správnost vyjádřená výtěžností metody pro suché krevní skvrny KIV, KIC a KMV byla následující: 104,98% (CV 1,79%), 104,00% (CV 3,59%) a 101,99% (CV 4,85%). Vyvinuli jsme jednoduchou a selektivní HPLC metodu s fluorescenční detekcí pro stanovení oxokyselin v suchých krevních skvrnách a v plazmě.	cze
dc.format	64 s.	cze
dc.format.extent	397520 bytes	eng
dc.format.mimetype	application/pdf	eng
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Bez omezení	cze
dc.subject	branched-chain keto acids	eng
dc.subject	ketoisovalerate	eng
dc.subject	ketoisocaproate	eng
dc.subject	ketomethylvalerate	eng
dc.subject	newborn	eng
dc.subject	dried blood spots	eng
dc.subject	Plasma	eng
dc.subject	HPLC	eng
dc.subject	fluorescence detection	eng
dc.subject	oxokyseliny s rozvětveným řetězcem	cze
dc.subject	ketoisovalerát	cze
dc.subject	ketoisokaproát	cze
dc.subject	ketomethylvelrát	cze
dc.subject	nemoc javorového sirupu	cze
dc.subject	novorozenci	cze
dc.subject	suché krevní skvrny	cze
dc.subject	plazma	cze
dc.subject	fluorescenční detekce	cze
dc.title	Stanovení oxokyselin odvozených od aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcí	cze
dc.title.alternative	Determination of keto acids derived from branch chain amino acids using HPLC with fluorescence detection	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dc.date.accepted	2008
dc.description.abstract-translated	The branched-chain keto acids (ketoisovaleric acid, ketoisocaproic acid and ketomethylvaleric acid) are the first degradation products of these amino acids produced by enzymatic transamination with branched-chain amino acids transaminase. Highly increased concentrations of branched-chain keto acids in human plasma and blood lead to the clinical syndrome of maple syrup urine disease. A HPLC method with fluorescence detection for the measurement of branched-chain keto acids in plasma and dried blood spots has been developed and evaluated. The branched-chain keto acids were derivatized with o-phenylenediamine into 2 quinoxalinol derivatives. The quinoxalinol derivatives were separated by reversed-phase high-performance liquid chromatography using a column LiChroCart 125 4 Purospher RP-18e, 5 ?m with gradient elution. As mobile phase A was used the mixture of methanol and deionized water (55:45, v/v for plasma and 50:50, v/v for dried blood spots) and mobile phase B was used 100% methanol. The analytical performance of the method is satisfactory for clinical trials. The intra-assay coefficients of variation for KIV, KIC, KMV were 3.67%, 3.58% and 3.18% for dried blood spots. The calibration curve was linear with the tested range 0 100 ?mol/l for KIV, KMV, KIC. The recoveries were as follows: 104.98% (CV 1.79%), 104.00% (CV 3.59%) and 101.99% (CV 4.85%) for dried blood spots. We have developed a simple and a selective HPLC method with fluorescence detection for the determination branched-chain keto acids in dried blood spots and plasma.	eng
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.identifier.signature	D18021
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze