Průkaz vybraných patogenů způsobujících kongenitální pneumonii u nedonošených novorozenců pomocí molekulárně biologických metod

Baranová, Lucia

Digitální knihovna UPCE
→
Fakulta chemicko-technologická / Faculty of Chemical Technology
→
Katedra biologických a biochemických věd / Department of Biological and Biochemical Sciences
→
Diplomové práce / Theses KBBV FCHT (Mgr.)
→
Zobrazit záznam

dc.contributor.advisor	Mazurová, Jaroslava
dc.contributor.author	Baranová, Lucia
dc.date.accessioned	2008-08-12T07:13:14Z
dc.date.available	2008-08-12T07:13:14Z
dc.date.issued	2008
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10195/29136
dc.description.abstract	Včasná diagnostika kongenitálních pneumonií způsobených Chlamyda trachomatis, Ureaplasma urealyticum a Ureaplasma parvum je nezbytná z důvodu nedostatečně vyvinutého imunitního systému u předčasně narozených novorozenců. Snahou naší práce proto bylo urychlení detekce DNA těchto patogenů, aby mohla být u těchto pacientů co nejrychleji zahájena cílená antibiotická léčba. Doposud používaná metoda pro průkaz DNA Ch. trachomatis a Ureaplasma spp. je časově náročná (24 až 48 hodin), např. úvodní inkubace při izolaci DNA trvá 14 až 16 hodin. Cílem naší práce proto bylo zkrácení izolačního postupu bez snížení citlivosti detekce DNA. Výsledkem našich pokusů byla optimalizace izolace DNA trvající pouze 1,5 hodiny pro Ch. trachomatis a 3 hodiny pro Ureaplasma spp.. V práci jsme se rovněž zabývali vlivem rychlosti centrifugace. Tento vliv byl pozorován pouze při průkazu DNA Ch. trachomatis, kde 8000 otáček za minutu zlepšovalo možnost jejího záchytu. Ke značnému zrychlení diagnostiky ureaplazmat přispělo i zavedení komerční real-time PCR s využitím přístroje Rotor-Gene 6000, která plně nahradila používanou in-house nested PCR. Dále jsme se zaměřili na preanalytickou fázi vyšetření, tj. určení stability vzorků před a po dodání do laboratoře. V případě aspirátů z dolních dýchacích cest a žaludku u novorozenců je optimální dodání v co nejkratší době, nejpozději do 24 hodin při 4 °C. V případě potřeby (např. přes víkend) je možné zamražení na -20 °C.	cze
dc.format	81 s.	cze
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.subject	congenital infection	eng
dc.subject	preanalytical phase	eng
dc.subject	kongenitální infekce	cze
dc.subject	Chlamydia trachomatis	cze
dc.subject	Ureaplasma urealyticum	cze
dc.subject	Ureaplasma parvum	cze
dc.subject	DNA	cze
dc.subject	real-time PCR	cze
dc.subject	preanalytická fáze	cze
dc.title	Průkaz vybraných patogenů způsobujících kongenitální pneumonii u nedonošených novorozenců pomocí molekulárně biologických metod	cze
dc.title.alternative	Detection of selected pathogens causing congenital pneumonia in preterm neonates by molecular biology methods	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dc.date.accepted	2008
dc.description.abstract-translated	Early diagnosis of congenital pneumonia of prematurely born infants is necessary because of their immature immune system. Congenital pneumonia is cause by pathogens Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum. The objective of our work was to speed up the detection of DNA of these pathogens so an early treatment of prematurely born infants could promptly begin with antibiotics. The detection method currently used for DNA of Chlamydia trachomatis and Ureaplasma spp. is time-consuming and takes 24 to 48 hours, for instance an initial incubation when DNA is isolated takes 14 to 16 hours. Our goal was to shorten the isolation process without influencing the sensitivity of detection of DNA. A result of our experiments is optimization in isolation of DNA, which takes now only 1.5 hours for Ch. trachomatis and 3 hours for Ureaplasma spp.. We also studied the influence of centrifugation speed. The influence was observed only during detection of DNA of Ch. trachomatis, where 8000 rotations per minute improved its detection. The implementation of a commercial real-time PCR with a Rotor-Gene 6000 device, which fully replaces an in-house nested PCR, contributed significantly to expedite the diagnosis of ureaplasmas. Attention was paid to the preanalytical phase of examination, eg. to specify the stability of samples before and after transport to laboratory. In the case of aspirates of airways and stomach of newborns it is optimal to transport them in the shortest time, within at least 24 hours at 4 °C. If needed, during the weekend, it is possible to freeze them at -20 °C.	eng
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.identifier.signature	D18028
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze