| dc.contributor.advisor |
Slováková, Marcela |
|
| dc.contributor.author |
Švehlová, Lucie
|
|
| dc.date.accessioned |
2008-08-12T06:43:37Z |
|
| dc.date.available |
2008-08-12T06:43:37Z |
|
| dc.date.issued |
2008 |
|
| dc.identifier |
Univerzitní knihovna (sklad) |
cze |
| dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/10195/28897 |
|
| dc.description.abstract |
Cílem práce bylo připravit modelový bioafinitní systém použitelný k izolaci specifického ligandu a použít jej ke studiu míry nespecifické sorpce biomolekul a kvantifikaci ligandu. Interagujícím biospecifickým párem byl modelový antigen chymotrypsin a anti-chymotrypsinové protilátky. Zdrojem specifických protilátek bylo odsolené hyperimunní prasečí sérum. Izolace a purifikace byla provedena nespecifickou metodou iontově výměnné chromatografie, a dále specifickými metodami s využitím proteinu A nebo chymotrypsinu kovalentně vázaného k nosiči. Protilátky byly poté imobilizovány na magnetické částice s různými funkčními skupinami (-COOH, -NHNH2, -SH), a to neorientovaným i orientovaným způsobem. Takto zhotovené imunosorbenty byly využity k izolaci afinantu - chymotrypsinu. U připravených imunosorbentů byla studována úspěšnost imobilizace protilátek, k tomu byly použity metody SDS-PAGE, spektrofotometrická, bioafinitní se specifickou protilátkou značenou enzymem (tzv. konjugát). Další charakterizací zhotovených imunosorbentů bylo jejich využití k izolaci afinantu-chymotrypsinu. U připravených imunosorbentů byla studována nespecifická sorpce. Jako nejúčinnější se jevila inkubace s 1% BSA. Specifické metody vykazovaly větší stupeň adsorbovaných proteinů. |
cze |
| dc.format |
87 s. |
cze |
| dc.language.iso |
cze |
|
| dc.publisher |
Univerzita Pardubice |
cze |
| dc.subject |
anti-chymotrypsin antibodies |
eng |
| dc.subject |
immobilization |
eng |
| dc.subject |
immunosorbents |
eng |
| dc.subject |
conjugate |
eng |
| dc.subject |
SDS-PAGE electrophoresis |
eng |
| dc.subject |
non-specific sorption |
eng |
| dc.subject |
bioafinitní systém |
cze |
| dc.subject |
ligand |
cze |
| dc.subject |
chymotrypsin |
cze |
| dc.subject |
anti-chymotrypsinové protilátky |
cze |
| dc.subject |
imobilizace |
cze |
| dc.subject |
imunosorbenty |
cze |
| dc.subject |
konjugát |
cze |
| dc.subject |
SDS-PAGE elektroforéza |
cze |
| dc.subject |
nespecifická sorpce |
cze |
| dc.title |
Použití metod bioafinitní chromatografie ke studiu nespecifické sorpce a kvantifikace ligandu |
cze |
| dc.title.alternative |
Methods of bioaffinity chromatography used for study of non-specific sorption on carrier and for quantification of ligand |
eng |
| dc.type |
diplomová práce |
cze |
| dc.date.accepted |
2008 |
|
| dc.description.abstract-translated |
The aim of this work was to prepare a model bioaffinity system for the isolation of the specific ligand and use it for studying the intensity of a non-specific sorption of the biomolekul and the quantification of ligand. The complementary biospecific pair was a model antigen chymotrypsin and anti-chymotrypsin antibodies. The source of the specific antibodies was a desalting hyperimmune pig's serum. The isolation and the purification was done by a non-specific method of the ionexchange chromatography, then with a specific method by using protein A or chymotrypsin coupled covalently to particles. Then the antibodies were coupled to the magnetic particles with the different functional groups (-COOH, -NHNH2, -SH), namely by a non-oriented and an oriented way. The immunosorbents prepared in this way were studied afterwards for the efficient immobilization of the antibodies by using SDS-PAGE electrophoresis, the spectrophotometry, the bioaffinity with the specific antibody marked by the enzyme socalled conjugate. Another characterization of the immunosorbents was its application for the isolation of affinant-chymotrypsin. The immunosorbents were studied for blocking of a non-specific sorption. The most efficient blocking agent was a solution of 1% BSA. Other specific blocking methods embodyed higher degree of a non-specific sorption of proteins. |
eng |
| dc.description.department |
Katedra biologických a biochemických věd |
cze |
| dc.thesis.degree-discipline |
Analýza biologických materiálů |
cze |
| dc.thesis.degree-name |
Mgr. |
cze |
| dc.thesis.degree-grantor |
Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická |
cze |
| dc.identifier.signature |
D18031 |
|
| dc.thesis.degree-program |
Speciální chemicko-biologické obory |
cze |
| dc.description.grade |
Dokončená práce s úspěšnou obhajobou |
cze |
