Použití metod bioafinitní chromatografie ke studiu nespecifické sorpce a kvantifikace ligandu
Diplomová práce Náhled není k dispozici
Datum publikování
2008
Autoři
Vedoucí práce
Oponent
Název časopisu
Název svazku
Vydavatel
Univerzita Pardubice
Abstrakt
Cílem práce bylo připravit modelový bioafinitní systém použitelný k izolaci specifického ligandu a použít jej ke studiu míry nespecifické sorpce biomolekul a kvantifikaci ligandu. Interagujícím biospecifickým párem byl modelový antigen chymotrypsin a anti-chymotrypsinové protilátky. Zdrojem specifických protilátek bylo odsolené hyperimunní prasečí sérum. Izolace a purifikace byla provedena nespecifickou metodou iontově výměnné chromatografie, a dále specifickými metodami s využitím proteinu A nebo chymotrypsinu kovalentně vázaného k nosiči. Protilátky byly poté imobilizovány na magnetické částice s různými funkčními skupinami (-COOH, -NHNH2, -SH), a to neorientovaným i orientovaným způsobem. Takto zhotovené imunosorbenty byly využity k izolaci afinantu - chymotrypsinu. U připravených imunosorbentů byla studována úspěšnost imobilizace protilátek, k tomu byly použity metody SDS-PAGE, spektrofotometrická, bioafinitní se specifickou protilátkou značenou enzymem (tzv. konjugát). Další charakterizací zhotovených imunosorbentů bylo jejich využití k izolaci afinantu-chymotrypsinu. U připravených imunosorbentů byla studována nespecifická sorpce. Jako nejúčinnější se jevila inkubace s 1% BSA. Specifické metody vykazovaly větší stupeň adsorbovaných proteinů.
Rozsah stran
87 s.
ISSN
Trvalý odkaz na tento záznam
Projekt
Zdrojový dokument
Vydavatelská verze
Přístup k e-verzi
Název akce
ISBN
Studijní obor
Analýza biologických materiálů
Studijní program
Speciální chemicko-biologické obory
Signatura tištěné verze
D18031
Umístění tištěné verze
Univerzitní knihovna (sklad)
Přístup k tištěné verzi
Klíčová slova
anti-chymotrypsin antibodies, immobilization, immunosorbents, conjugate, SDS-PAGE electrophoresis, non-specific sorption, bioafinitní systém, ligand, chymotrypsin, anti-chymotrypsinové protilátky, imobilizace, imunosorbenty, konjugát, SDS-PAGE elektroforéza, nespecifická sorpce