Studium kinetiky a mechanismu inhibice acetylcholinesterasy

Abstract

Byla testována in vitro homologická řada 14 nechirálních derivátů 2(2-alkoxyfenyl)- 1H-imidazolu a 5 chirálních derivátů imidazolu jako inhibitorů hydrolýzy acetylcholinu pomocí enzymového preparátu acetylcholinesterasy z mořského úhoře. Bylo zjištěno pro všechny tyto inhibitory, že závislosti aktuálních koncentrací acetylcholinu, cholinu a kyseliny octové na čase, naměřené originální HPLC metodou při uvedené hydrolýze ve vsádkovém míchaném reaktoru při 250C, pH 8 (fosfátový pufr), iontové síle 0.11 M a katalytické aktivitě enzymového preparátu 0.14 U ml-1 reakční směsi, vyhovují s pravděpodobností více než 90 % reakčnímu schématu kompetitivní nevratné inhibice. Byly stanoveny všechny rychlostní konstanty, včetně té, která rozhoduje o rychlosti inhibice (k3 = 0.71 - 5.3 M-1 s-1) a kvalifikovaný odhad absolutní koncentrace acetylcholinesterasy v reakční směsi (40 - 110 nM). Podle hodnoty k3, tj. rychlosti inhibice, jsou nadějné nechirální inhibitory 5, 13 a chirální inhibitory 1*, 2* a 3*. Orientační stanovení doby trvání inhibičního účinku u inhibitoru 13 ukázalo, že katalytická aktivita použitého enzymu klesla v reakční směsi po 3 minutách reakce asi na 12 % původní hodnoty a na této hodnotě setrvala více než 2 dny.