Izolace a analýza monoklonálních protilátek v séru pro diagnostiku mnohočetného myelomu

Abstract

Diplomová práce se zabývá proteomickou analýzou biologických vzorků a k tomu využívá metody, které jsou v proteomice běžné k identifikaci, separaci nebo kvantifikaci proteinů a peptidů. Hlavním úkolem praktické části byla izolace protilátek ze séra a jejich následná HPLC nebo LC-MS/MS analýza. Byly analyzovány jak vzorky séra s přídavkem monoklonálních protilátek, tak i vzorky pacientů s mnohočetným myelomem. Dílčím úkolem byl také výběr vhodného postup přípravy sér před vlastní LC-MS/MS analýzou. Při porovnání postupu štěpení vzorků proteolytickými enzymy se ukázalo jako nejvhodnější předizolovat protilátky séra na afinitních nosičích. Další postup přímého štěpení séra nebo separace a frakcionace vzorků pomocí HPLC s následným štěpením nebyly tak výtěžné. Všechny takto připravené vzorky, ať už se jednalo o vzorky definované nebo vzorky pacientů, byly pak úspěšně analyzovány pomocí LC-MS/MS a softwarově vyhodnoceny.