Změny metabolismu buněk po působení modelových toxických látek

Abstract

Diplomová práce se zabývá změnami energetického metabolismu buňky po působení modelových toxických látek. Teoretická část se věnuje popisu mitochondrií, podrobnému popisu dýchacího řetězce, zejména syntéze ATP, a metodám detekce koncentrace ATP. Dále je zde popsán možný vztah proteinů teplotního šoku (= HSP) a apoptózy. V závěru jsou uvedeny metody pro detekci HSP proteinů. Experimentální část se věnuje optimalizaci přípravy buněčného materiálu a luminiscenční metody pro detekci intracelulární koncentrace ATP po působení modelových toxických sloučenin na buněčných liniích SH SY5Y a A549. Jako modelové jsme zvolili cisplatinu, CdCl2, acetaminofen a straurosporin. Pro popis změn energetického metabolismu u testovaných buněk jsme použili WST 1 test, fluorescenční sondu monochlorobiman, stanovení koncentrace ATP a metodu Simple Western. Morfologii buněk inkubovaných s toxickými látkami jsme pozorovali pod mikroskopem ve fázovém kontrastu, pro vizualizaci cytoskeletu jsme zvolili fluorescenčně značený faloidin a pro pozorování jader sondu Hoechst 33258. V závěru práce jsou výsledky diskutovány.