Stanovení kyseliny lipoové v lidské plazmě metodou HPLC

Abstract

Kyselina lipoová je dithiolová sloučenina, která se používá v klinické medicíně a experimentálních modelech jako antioxidant. Zachovává si své antioxidační vlastnosti v obou jejich formách, oxidované i redukované, a reguluje recyklaci ostatních oxidovaných antioxidantů. Je stále více zřejmé, že kyselina lipoová může být velmi důležitá jako léčebný prostředek při diabetu. U diabetických pacientů užívajících kyselinu lipoovou buď intravenózně nebo perorálně bylo pozorováno blahodárné působení na regulaci hladiny glukosy. Důvodem je interakce kyseliny lipoové s regulačními prvky insulin-signální kaskády. Významné zlepšení v pozdních diabetických komplikací, zejména polyneuropatii, bylo prokázáno několika klinickými studiemi. Nynější experimenty zkoumají, zda-li může mít kyselina lipoová blahodárný vliv nejen v léčbě diabetu, ale také v prevenci kardiovaskulárního onemocnění. Kyselina lipoová upravuje pružnost cévní stěny, kdy magnetickou rezonancí a morfologickou analýzou bylo prokázáno, že snižuje rozvoj aterosklerotických plátů nejen snížením množství zánětlivých buněk, ale i obsahu tuků. Pro stanovení kyseliny lipoové existuje mnoho metod. Nicméně, většina z těchto metod není uspokojivá vzhledem k jejich nespecifitě, nedostatku citlivosti, dlouhodobé přípravě vzorku a potřebě drahých analytických zařízení. Snažili jsme se vytvořit jednoduchou a účinnou metodu pro stanovení redukované a oxidované formy kyseliny lipoové v lidské plasmě pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí na principu coulometrie. Zjistili jsme, že metoda je použitelná pro stanovení pouze oxidované formy. Během přípravy vzorku plasmy docházelo ke ztrátám redukované formy. Jako příčinu těchto ztrát jsme zatím vyloučili deproteinaci a časovou nestabilitu při úpravě vzorku. K vyřešení tohoto problému bude třeba ještě další upravování přípravy vzorku.