Srovnání aktivity genů MMP při hojení ran u zdravých a diabetických potkanů

Abstract

Matrixové metaloproteinázy (MMP) jsou enzymy, které proteolyticky degradují extracelulární matrix (ECM) a tím jsou odpovědné za remodelaci pojivové tkáně. Za fyziologických podmínek se podílejí na ontogenetickém vývoji, morfogenezi, angiogenezi, růstu a hojení ran. Objevují se také ve většině zánětlivých, degenerativních a maligních procesech. Hojení je komplikovaný děj, kterého se kromě MMP účastní celá řada buněk (neutrofily, lymfocyty, mastocyty, monocyty, makrofágy, fibroblasty, keratinocyty, endotel) a jimi vylučovaných působků (cytokiny, růstové faktory apod.). Tento děj probíhá v několika fázích: hemostáza, zánět, proliferační fáze, fibrotizace a tvorba jizvy. V této diplomové práci jsme se zaměřili na sledování změn aktivit vybraných MMP a jejich inhibitorů (TIMP) v průběhu hojení ran u zdravých a diabetických potkanů. Modelovými zvířaty byli zvoleni potkani Zucker Diabetic Fatty (ZDF), kterým byly odebírány v časových intervalech vzorky kůže, granulační tkáně a jizvy. Z těchto vzorků byla dále izolována celková RNA a syntetizována cDNA. Exprese genů byla stanovena metodu real-time PCR. Data byla statisticky zpracována pomocí Studentova t-testu (p ? 0,05). MMP zasahují do všech fází hojení a jejich exprese se v průběhu hojení mění. V neporušené kůži byly lehce zvýšené hodnoty exprese MMP-2, -3, -14 a TIMP-2. První den exprese prudce vzrostla u MMP-8, -9 a TIMP-1 a vzápětí prudce klesla. Od pátého dne hojení narůstá exprese MMP-13, -2, -14 a TIMP-2. Desátý den je exprese vysoká u MMP-13, -2, -10, -14, -12 a TIMP-2. I v čerstvé zahojené jizvě lze zaznamenat vyšší expresi MMP-2, -10, -13 -14 a TIMP-2. Nezaznamenali jsme žádné významné rozdíly v expresi sledovaných genů mezi zdravými a diabetickými zvířaty až na výjimku v neporušené kůži, kde byla hodnota exprese MMP-3 u samců. Při porovnání samců a samic byly hodnoty exprese MMP-2, MMP-14 a TIMP-2 u samců vyšší v neporušené kůži, naopak 3. den hojení byly u samic zvýšené hodnoty exprese MMP-14 a TIMP-2.