Publikace: Použití metod bioafinitní chromatografie ke studiu nespecifické sorpce a kvantifikace ligandu
Diplomová práce| dc.contributor.advisor | Slováková, Marcela | |
| dc.contributor.author | Švehlová, Lucie | |
| dc.date.accepted | 2008 | |
| dc.date.accessioned | 2008-08-12T06:43:37Z | |
| dc.date.available | 2008-08-12T06:43:37Z | |
| dc.date.issued | 2008 | |
| dc.description.abstract | Cílem práce bylo připravit modelový bioafinitní systém použitelný k izolaci specifického ligandu a použít jej ke studiu míry nespecifické sorpce biomolekul a kvantifikaci ligandu. Interagujícím biospecifickým párem byl modelový antigen chymotrypsin a anti-chymotrypsinové protilátky. Zdrojem specifických protilátek bylo odsolené hyperimunní prasečí sérum. Izolace a purifikace byla provedena nespecifickou metodou iontově výměnné chromatografie, a dále specifickými metodami s využitím proteinu A nebo chymotrypsinu kovalentně vázaného k nosiči. Protilátky byly poté imobilizovány na magnetické částice s různými funkčními skupinami (-COOH, -NHNH2, -SH), a to neorientovaným i orientovaným způsobem. Takto zhotovené imunosorbenty byly využity k izolaci afinantu - chymotrypsinu. U připravených imunosorbentů byla studována úspěšnost imobilizace protilátek, k tomu byly použity metody SDS-PAGE, spektrofotometrická, bioafinitní se specifickou protilátkou značenou enzymem (tzv. konjugát). Další charakterizací zhotovených imunosorbentů bylo jejich využití k izolaci afinantu-chymotrypsinu. U připravených imunosorbentů byla studována nespecifická sorpce. Jako nejúčinnější se jevila inkubace s 1% BSA. Specifické metody vykazovaly větší stupeň adsorbovaných proteinů. | cze |
| dc.description.abstract-translated | The aim of this work was to prepare a model bioaffinity system for the isolation of the specific ligand and use it for studying the intensity of a non-specific sorption of the biomolekul and the quantification of ligand. The complementary biospecific pair was a model antigen chymotrypsin and anti-chymotrypsin antibodies. The source of the specific antibodies was a desalting hyperimmune pig's serum. The isolation and the purification was done by a non-specific method of the ionexchange chromatography, then with a specific method by using protein A or chymotrypsin coupled covalently to particles. Then the antibodies were coupled to the magnetic particles with the different functional groups (-COOH, -NHNH2, -SH), namely by a non-oriented and an oriented way. The immunosorbents prepared in this way were studied afterwards for the efficient immobilization of the antibodies by using SDS-PAGE electrophoresis, the spectrophotometry, the bioaffinity with the specific antibody marked by the enzyme socalled conjugate. Another characterization of the immunosorbents was its application for the isolation of affinant-chymotrypsin. The immunosorbents were studied for blocking of a non-specific sorption. The most efficient blocking agent was a solution of 1% BSA. Other specific blocking methods embodyed higher degree of a non-specific sorption of proteins. | eng |
| dc.description.department | Katedra biologických a biochemických věd | cze |
| dc.description.grade | Dokončená práce s úspěšnou obhajobou | cze |
| dc.format | 87 s. | cze |
| dc.identifier | Univerzitní knihovna (sklad) | cze |
| dc.identifier.signature | D18031 | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10195/28897 | |
| dc.language.iso | cze | |
| dc.publisher | Univerzita Pardubice | cze |
| dc.subject | anti-chymotrypsin antibodies | eng |
| dc.subject | immobilization | eng |
| dc.subject | immunosorbents | eng |
| dc.subject | conjugate | eng |
| dc.subject | SDS-PAGE electrophoresis | eng |
| dc.subject | non-specific sorption | eng |
| dc.subject | bioafinitní systém | cze |
| dc.subject | ligand | cze |
| dc.subject | chymotrypsin | cze |
| dc.subject | anti-chymotrypsinové protilátky | cze |
| dc.subject | imobilizace | cze |
| dc.subject | imunosorbenty | cze |
| dc.subject | konjugát | cze |
| dc.subject | SDS-PAGE elektroforéza | cze |
| dc.subject | nespecifická sorpce | cze |
| dc.thesis.degree-discipline | Analýza biologických materiálů | cze |
| dc.thesis.degree-grantor | Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická | cze |
| dc.thesis.degree-name | Mgr. | cze |
| dc.thesis.degree-program | Speciální chemicko-biologické obory | cze |
| dc.title | Použití metod bioafinitní chromatografie ke studiu nespecifické sorpce a kvantifikace ligandu | cze |
| dc.title.alternative | Methods of bioaffinity chromatography used for study of non-specific sorption on carrier and for quantification of ligand | eng |
| dc.type | diplomová práce | cze |
| dspace.entity.type | Publication |