Porovnání metod pro stanovení proteinů v biologickém materiálu

Štochlová, Karolína

Publikace:
Porovnání metod pro stanovení proteinů v biologickém materiálu

Diplomová práceOmezený přístup

dc.contributor.advisor	Roušar, Tomáš	cze
dc.contributor.author	Štochlová, Karolína
dc.date.accepted	2015	cze
dc.date.accessioned	2015-08-10T07:47:14Z
dc.date.available	2015-08-10T07:47:14Z
dc.date.embargo	2035-05-07	cze
dc.date.issued	2015
dc.description.abstract	Proteiny jsou řazeny mezi základní živiny všech živých organismů, které jsou složeny z aminokyselinových zbytků. Proteiny se vyznačují celou řadou důležitých funkcí, například stavební, ochrannou nebo transportní. V současné době existují různé metody, které jsou využívány pro stanovení koncentrace proteinů v různých vzorcích. Tyto metody jsou nejčastěji spektrofotometrické, ale také imunochemické či fluorimetrické. Cílem naší práce bylo optimalizovat dvě zvolené metody pro stanovení koncentrace proteinů. Jednalo se o metodu dle Bradforda a o metodu s kyselinou bicinchoninovou. Dalším cílem naší práce bylo porovnat obě metody mezi sebou, charakterizovat jejich využití u biologických vzorků a prokázat možné interferující látky. Pro optimalizaci obou metod jsme připravili kalibrační řadu standardního hovězího albuminu. Z naměřené absorbance kalibrační řady jsme určili lineární rozsah kalibrace BSA v rozmezí koncentrací od 0 do 100 g/ml. Dále jsme hledali optimální teplotu či dobu inkubace pro testování stability vznikajícího komplexu. Pro metodu dle Bradforda jsme zvolili jako optimální laboratorní teplotu. U metody s kyselinou bicinchoninovou se jevila optimální teplota 37 °C, ale z důvodu co nejbližšího porovnání metod jsme využívali teplotu laboratorní. Obě metody jsme využili také pro stanovení koncentrace proteinů v biologickém materiálu, kterým byly homogenáty myší jaterní a ledvinné tkáně. V rámci stanovení interference jsme použili několik aminokyselin a látek s biologickým účinkem. Všechny aminokyseliny jsme vyhodnotili jako látky neinterferující u obou metod. V případě látek s biologickým účinkem jsme prokázali interferenci u metody s kyselinou bicinchoninovou; jednalo se o quercetin a acetaminofen, u něhož jsme prokázali interferenci u koncentrací nad 1 mol/l. Na základě našich výsledků lze říci, že obě metody jsou jednoduché, rychlé a vhodné pro stanovení koncentrace proteinů ve standardních vzorcích, v případě předpokládané interference je ale vhodnější použít metodu dle Bradforda.	cze
dc.description.abstract-translated	Proteins are considered as essential nutrients for all living organisms, which are composed of amino acid residues. Proteins account for a number of important functions, such as construction of cells, immunity or transport. Currently, a variety of methods have been used for determination of protein concentration in biological samples. These methods are most often based on spectrophotometric, immunochemical or fluorimetric detection. The aim of our study was to optimize two protein assays for determination of protein concentrations. Bradford protein assay and the bicinchoninic acid protein assay. Another aim of our study was to compare these two assays, to describe advantages and disadvantages their use in biological samples and to determine the potentially interfering substances. To optimize both assays, we prepared bovine albumin standards. Based on the calibration curve, we determined the range of linearity of BSA 0 100 g/ml. Furthermore, we tested temperature and incubation time. We chose room temperature as optimal for Bradford protein assay. In the bicinchoninic acid protein assay, the temperature optimum appeared to be at 37 °C but we used the room temperature in all experiments to posses the same conditions as in Bradford protein assay. Both methods were used also for determination of protein concentrations in biological material (mouse liver and kidney). For determination of interference, we used several amino acids and substances with biological activity. All amino acids exhibited no interference in both methods. Another group of compounds consisted of four substances which interfered only in case of bicinchoninic acid protein assay. The strong interference was proved in quercetin and acetaminophen, which interfered even at concentrations above 1 mol/l. Based on our results, we conclude that both protein assays are simple, rapid and suitable for the determination of protein concentration in standard samples. If any interference anticipated, the Bradford protein assay shall be used as preferable.	eng
dc.description.defence	Prezentace výsledků diplomové práce.Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. Studentka zodpověděla vaechny dotazy a připomínky k diplomové práci.	cze
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	95 s.	cze
dc.format.extent	2040765 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.identifier	Univerzitní knihovna (studovna)	cze
dc.identifier.signature	D32393	cze
dc.identifier.stag	27230	cze
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/60523
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Práce není přístupná	cze
dc.subject	Protein	cze
dc.subject	Bradford protein assay	cze
dc.subject	Bicinchoninic acid protein assay	cze
dc.subject	interference	cze
dc.subject	proteiny	cze
dc.subject	kyselina bicinchoninová	cze
dc.subject	metoda dle Bradforda	cze
dc.subject	interference	cze
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.title	Porovnání metod pro stanovení proteinů v biologickém materiálu	cze
dc.title.alternative	Comparison of protein assays for use in biological material	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication