Povrchová modifikace magnetických částic pro efektivní izolaci krevních buněk

Abstract

Tato diplomová práce je součástí projektu zabývajícího se vývojem nového mikroprůtokového zařízení pro izolaci cirkulujících nádorových buněk z plné krve. Stanovení cirkulujících nádorových buněk v periferní krvi pacientů je důležité nejen pro včasné odhalení nádorového bujení, ale hlavně pro monitorování průběhu onemocnění, úspěšnosti protinádorové terapie a detekce návratu onemocnění. Předmětem naší práce bylo vyvinout bioaktivní nosič pro toto zařízení. Cílem naší diplomové práce byl vývoj nového imunosorbentu s minimální nespecifickou sorpcí pro izolaci cirkulujících nádorových buněk a jeho porovnání s komerčně dodávaným nosičem. Ve výzkumné části jsme nejprve modifikovali povrch magnetických částic polyetylenglykolem, abychom dosáhli minimální nespecifické sorpce. Porovnávali jsme také účinnost vazby modelových IgG na magnetické částice PGMA povrchově modifikované polyetylenglykolem s funkčními skupinami karboxylovými, hydrazidovými nebo hydroxylovými. Dále jsme porovnávali nespecifickou sorpci a schopnost specifické vazby imobilizovaných protilátek povrchově modifikovaného imunosorbentu polyetylenglykolem s nosičem nemodifikovaným. Pro ověření účinnosti specifické vazby připraveného imunosorbentu jsme si zvolili jako modelový systém biospecifický pár protein p53 a protilátky anti-p53. Potom jsme porovnali specifickou vazbu buněk EpCAM+ a nespecifickou sorpci buněk EpCAM- při imunomagnetické separaci buněk námi připraveným imunosorbentem a komerčně dostupným imunosorbentem. Nakonec jsme porovnávali schopnost imunosorbentů izolovat buňky s různou mírou exprese molekuly EpCAM. Námi připravený imunosorbent se účinností specifické vazby buněk EpCAM+ vyrovnal komerčně dostupnému nosiči, ale nespecifická sorpce buněk EpCAM- byla vyšší.