Stanovení koenzymu Q10 v lidské plazmě

Abstract

Koenzym Q10 je důležitý v tucích rozpustný antioxidant. Pro plánovanou studii oxidačního stresu, která bude založena na sledování poměru koncentrace redukované formy koenzymu Q10 (CoQ10H2) ku celkové koncentraci koenzymu Q10 (TCoQ10), označované jako CoQ10H2/TCoQ10, jako jeho markeru, jsme vyvinuli metodu simultánního stanovení ubichinolu-10 a ubichinonu-10 v lidské plazmě s použitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie s elektrochemickou detekcí a použitím vnitřního standardu (koenzym Q9). Mobilní fáze byla složena ze směsi methanol/2-propanol (88:10 v/v). Zvolený průtok byl 1 ml/min a detekce probíhala v redukčně-redukčně-oxidačním módu (-600 mV; -150 mV; +600 mV). Pro analýzu byla plazma odebírána do zkumavek s obsahem EDTA. Vzorky byly centrifugovány a extrahovány s použitím hexanu a methanolu. Odezva detektoru byla lineární v rozsahu koncentrací 100-4000 nmol/l pro ubichinon-10 a 400-4000 nmol/l pro ubichinol-10. Přesnost stanovení v sérii (intra-assay) byla charakterizována variačním koeficientem: pro ubichinol-10 byl 7,2 %, pro ubichinon-10 byl 11,5 %. Výtěžnost metody (recovery) byla 92,3 % s CV 11,1 %. Touto metodou je rovněž možnost stanovit koncentraci beta-karotenu.