Stanovení vybraných oxokyselin v biologických vzorcích metodou plynové chromatografie s hmotnostní detekcí

Abstract

Stanovení 2-oxokyselin má klinický význam, protože 2-oxokyseliny jsou klíčovými meziprodukty v řadě hlavních biochemických cest. U pacientů s některými dědičnými metabolickými chorobami jsou hladiny 2-oxokyselin zvýšené, např. u fenylketonurie. Tato práce se zabývá zavedením metody plynové chromatografie s hmotnostní detekcí pro stanovení 2-oxokyselin v biologických vzorcích. Metoda dokáže simultánně stanovit sedm významných 2-oxokyselin (pyruvát, 2 oxoglutarát, fenylpyruvát, 2-oxoisovalerát, 2-oxoisokapronát, 2-oxo-3-methylvalerát, oxalacetát). Za účelem derivatizace oxoskupiny 2-oxokyselin byly testovány tři derivatizační činidla, 2,4-dinitrofenylhydrazin, O-(2,3,4,5,6-pentafluorobenzyl)hydroxylamin a o fenylendiamin, derivatizace karboxylové skupiny pak N methyl N (trimethylsilyl)-trifluoroacetamid v 1% trimethylchlorsilanu, N,O bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamid v 1% trimethylchlorsilanu, směs methanolu a acetylchloridu a BF3 v ethanolu. Pro separaci derivátů 2-oxokyselin byla použita kapilární kolona HP-5, kdy byly deriváty 2-oxokyselin separovány do 40 minut. Linearita byla dosažena v celém rozsahu testovaných koncentrací. Přesnost v sérii, vyjádřená variačním koeficientem, se u jednotlivých 2-oxokyselin výrazně lišila. Variační koeficient přesnosti stanovení pyruvátu a 2-oxoisokapronátu v plazmě byl do 7 %. Variační koeficient přesnosti stanovení dalších 2-oxokyselin byl i několikanásobně vyšší.