Stanovení glutathiondisulfidu v plné krvi pomocí HPLC s fluorescenční detekcí

Abstract

Porušení rovnováhy mezi prooxidačními a antioxidačními pochody v buňkách vede k oxidačnímu stresu. Významný podíl na udrţení této rovnováhy má glutathion. Tento nejhojněji zastoupený antioxidant se v buňkách vyskytuje převáţně v redukované formě. Působením oxidačních pochodů dochází k jeho přeměně na glutathiondisulfid. Důleţitým ukazatelem oxidačního stresu je poměr glutathiondisulfidu ke glutathionu. V této diplomové práci jsme se zaměřili na vypracování postupu pro stanovení glutathiondisulfidu v plné krvi a plazmě metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí. Při přípravě vzorku jsme dbali především na to, abychom v maximální moţné míře zabránili oxidaci glutathionu. Tento postup zahrnuje odběr krevních vzorků do zkumavek obsahujících citrát sodný a kyselinu citronovou (pH 4,2), přídavek alkylačního činidla (N-ethylmaleimidu) ihned po odběru a precipitaci proteinů 15% kyselinou trichloroctovou. Vzorky, které nelze zpracovat a analyzovat ihned, musí být ošetřeny N-ethylmaleimidem ještě před skladováním.