Tau protein - analytické a obohacovací techniky pro detekci markeru Alzheimerovy choroby

Abstract

Tato diplomová práce je zaměřena na analýzu fosfoproteinů a zejména fosfopeptidů pomocí vybraných izolačních a obohacovacích technik ve spojení s MALDI-MS s cílem ověřit jejich použitelnost a zavést je do laboratorní praxe. Teoretická část je věnována problematice Alzheimerovy choroby se zaměřením na tau protein, jeho význam, funkci a důsledky jeho hyperfosforylace v mozkové tkáni. Cílem bylo seznámit čtenáře s důležitostí posttranslačních modifikací se zaměřením na fosforylace. Experimentální část zahrnuje separaci pomocí gelové elektroforézy, optimalizaci proteolytického štěpení modelových fosfopeptidů v gelu a následnou MALDI-MS analýzu s využitím různých matric. Dále jsou zde zahrnuty různé obohacovací techniky fosfopeptidů: IMAC, využití TiO2 částic a SIMAC a další techniky derivatizace peptidů pomocí SPITC pro de novo sekvenaci peptidů za účasti exopeptidáz. Uvedené metody a získané poznatky mají potenciál pro využití při studiu a diagnostice Alzheimerovy choroby.