Exprese genů v jaterních fibroblastech kultivovaných v trojrozměrné matrix

Abstract

Fibrotizační pochody v játrech jsou důsledkem aktivace určitých typů buněk - jaterních hvězdicových buněk (HSC) a jaterních myofibroblastů (MFB). V této práci jsme se zabývali vlivem kultivačního prostředí na expresi genů v jaterních MFB potkanů. Srovnávali jsme běžný způsob kultivace buněk na polystyrenových Petriho miskách s kultivací v trojrozměrném (3D) prostředí a sledovali vliv dvou rozdílných látek - růstového faktoru FGF-1 a WY-14643, ligandu receptorů PPAR?. MFB byly izolovány opakovaným pasážováním z frakce neparenchymových jaterních buněk potkanů. Poté byly vysazeny na plast a do kolagenního, respektive fibrinového gelu. Do kultivačního média byly přidány sledované látky. Buňky byly sklízeny v různých časových intervalech. Poté z nich byla izolována celková RNA a syntetizována cDNA. Exprese genů byla stanovena pomocí rtRT-PCR. Data byla statisticky zpracována pomocí Studentova t-testu (p ? 0,05). Naše práce ukázala, že růstový faktor FGF-1 a ligand PPAR? WY-14643 ovlivňují expresi genů jaterních myofibroblastů. Účinek obou látek byl časově závislý. Mezi ovlivněnými geny byly proteiny extracelulární matrix, matrixové metaloproteinázy i některé cytokiny. Zjistili jsme, že je růstový faktor FGF-1 i syntetická látka WY-14643 rozdílně ovlivňují expresi mRNA v buňkách kultivovaných na plastové Petriho misce a v buňkách kultivovaných v 3D prostředí kolagenního gelu.