Studium interakce HU proteinu Francisella tularensis s hostitelskou buňkou

Abstract

Tato práce je součástí projektu, který má za úkol zjistit, zda DNA vazebný protein HU bakterie Francisella tularensis interaguje s hostitelskou buňkou a pokud ano, jakým způsobem by ji HU protein mohl ovlivňovat. V jednotlivých kapitolách této práce je vypracována problematika týkající se bakterie F. tularensis a jejího zařazení do taxomické nomenklatury, jsou vypsány prozatím známé faktory virulence a stručně shrnuty informace o bakteriálním genomu, ostrovu patogenity podílejícím se na virulenci a HU proteinu. Jelikož se F. tularensis řadí mezi intracelulární bakterie, je dopodrobna rozepsán proces interakce s různými typy buněk - ať nefagocytujícími nebo buňkami patřícími do monocyto-makrofágového systému. V dalších kapitolách je popsána laboratorní diagnostika F. tularensis a tularémie i jejích klinických projevů. Poslední kapitola je věnována v dnešní době hojně zkoumané problematice F. tularensis jako nástroje možného bioteroristického zneužití. Experimentální část obsahuje tyto dílčí kroky: Kultivace bakterií E. coli TOP10 a XL-1 Blue a F. tularensis subsp. holarctica FSC200. Příprava konstruktů značeného proteinu pomocí různých typů značek (GFP, histidinové (HIS) a HA kotvy) pomocí metod molekulární biologie (tzv. "overlap" PCR, PCR, restrikční štěpení, chemická transformace a elektroporace). Značený HU protein jsme prokazovaly pomocí SDS-PAGE a Western-blottingu. Studiu lokalizace proteinu v hostitelské buňce pomocí techniky fluorescenční mikroskopie předcházela izolace, kultivace a infekce myších kostně-dřeňových makrofágů (BMMs).